荧光分析法实验版PPT课件.ppt

即对一定的荧光物质的稀溶液（abc≤0.05），在一定的温度下，当激发光的波长、强度和液层厚度都固定后，其荧光强度与该溶液的浓度成正比。这是荧光分析定量的基础。 * 第三节 仪器 一、仪器的构造及原理 * 仪器类型很多，基本结构相似，一般包括五部分：激发光源、单色器、样品池、检测器和记录显示部分。 1. 光源 能发射紫外到可见区波长的光、强度大、稳定。常用的有溴钨灯、高压汞灯、氙灯。 * 二、仪器类型 1. 光电荧光计 用滤光片作单色器（激发滤光片和荧光滤光片），溴钨灯或高压汞灯作光源，光电管为检测器。 2. 荧光分光光度计 用氙灯作光源、光栅作单色器，光电倍增管为检测器。可连续扫描激发光谱和荧光光谱。 * 仪器光路示意图 闪烁Xe灯 狭缝 反光镜 光栅 激发单色器 发射单色器 滤光片 反光镜 棱镜 光电倍增管 （参比信号） 液池 光电倍增管 （样品信号） 参比检测器 * WGY-10型荧光分光光度计具有双单色器，可以记录物质的激光光谱和荧光光谱。采用计算机完成仪器的系统控制和数据采集。其工作原理如下： 由光源发出的光，通过激发单色器后变成单色光，而后照在荧光池中的被测样品上，由此激发出的荧光被发射单色器收集后。经单色器分散成单色光而照射在光电倍增管上转换成相应的电信号，经放大器放大反馈入A/D转换单元，将模拟电信号转换成相应的数字量。并通过显示器或打印机显示记录下被测样品的图谱。这就是荧光光度计的基本工作原理。 * WGY-10荧光分光光度计仪器的使用 点击电脑桌面“WGY-10荧光分光光度计”的图标进入“WGY-10”友好界面。（此时分别进行激发光珊检零，激发光珊检索为起始波长，激发光珊检索为起始波长等一系列检索）约3分钟 点击菜单栏“发射”图标 先固定发射波长为400 nm，出现“正在检索发射波长，请稍等``````”如荧光强度大于50，负高压选95，荧光强度小于50，则选100 工作模式：激发扫描 起始波长：250 终止波长：350 负高压为：100（95） 点击“单程”输入通道号，出现激发光谱（通道1）然后点击“读取数据”进入“自动寻峰”保存[txt文件]→ 清除当前（建立）在曲线上找最大激发波长297 nm * 再选定激发波长297nm（正在检索激发波长） 工作模式：发射扫描 起始波长：350 终止波长：500 负高压为：100（90） 点击“单程”输入通道号，出现发射光谱（通道2）然后点击“读取数据”进入“自动寻峰”保存[txt文件]→ 清除当前（建立）在曲线上找最大激发波长397 nm点击文件，选择保存。 再选定发射波长397nm，起始波长改为250nm点击“单程”选择通道2。则出现水杨酸溶液的光谱图（含激发光谱和发射光谱）点击保存文本文件，在点确定，输入文件名，“保存” 点击“工作”再点“定量测量”出现“定量测量-标准曲线”,点击“编辑”，修改浓度单位ug/mL，确定点击“添加”依次输入浓度0、1.2、2.4、3.6、4.8、6.0再分别点击“本底测量”、“单项测量”最后点击“计算标准曲线”最后“样品测量”。 * 后期作图 1.打开origin软件→　　　→x.txt→找到已保存的文件（两个通道）→Add→OK 点击 →　　　→Add→ →Add→OK。出现光谱图 2.双击X AXTS TITLE，出现对话框，改为x/nm,双击y Ax改为y/F.点击 图标，移动鼠标到峰点，再点T图标，再点左键，输入数值297nm 重复再输入另一峰值 重复输入excitation emission 即成 3.再点击File(电脑左上方) →（save project）点击，输入文件名，点保存。 4．最后点击→Edit(在File后)，点击copy page,即可复制在word文档。 这件完整的图形即可在用U盘拷贝了。 * 第五节 荧光分析法的应用 * （一） 有机物的荧光分析 （二） 无机元素的荧光分析 （三）在生命科学中的应用  *