鸡新城疫的诊断.ppt

技能训练8 鸡新城疫的诊断 ; 掌握鸡新城疫的临床诊断和实验室诊断的方法;疑似鸡新城疫病死鸡、剪刀、镊子、病理剖检记录表、工作服、胶靴、围裙、橡胶手套和来苏儿等。 9～11日龄SPF鸡胚、恒温箱、照蛋器、蛋盘、接种箱、注射器（1～5ml）、针头、中号镊子、剪刀、眼科剪刀和镊子、毛细吸管、橡皮乳头、灭菌平皿、试管、吸管（0.5ml、1ml、5ml）、酒精灯、试管架、胶布、蜡、锥子、煮沸消毒器、消毒剂（3%碘酊棉、75%酒精棉、5%石炭酸）、离心机、离心管、生理盐水、96孔V型微量血凝集反应板、??量吸液器、混合振荡器；1%鸡红细胞悬液、鸡新城疫弱毒疫苗、鸡新城疫标准阳性血清等。 ;方法步骤;（一）ND的临床诊断 ;（二）ND的实验室诊断 ;1．病毒的分离培养;（2）鸡胚接种 用9～11日龄的SPF鸡胚（如果没有SPF鸡胚，也可用非免疫鸡胚），将上述处理过的材料，取0.1～0.2ml接种于尿囊腔内。 接种后以熔化的石蜡将卵壳上的接种孔封闭，继续置温箱内。 每日上下午各照蛋一次，连续观察5d，接种24h内死亡的鸡胚，废弃不用，于24h后死亡的鸡胚，立即取出置4℃冰箱冷4h以上（气室向上）。 然后用无菌操作吸取尿囊液，并做无菌检查，尿囊液浑浊应废弃。留下无菌的尿囊液置低温冰箱保存，供作进一步鉴定。 在这同时可将鸡胚倾入一平皿内，仔细观察病变。由新城疫病毒致死的鸡胚，胚体全身充血，在胚头、胸、背、翅和趾部有小出血点，尤其以翅，趾部明显，这在诊断上有参考价值。 ;2．病毒的鉴定;（1）微量血凝试验（HA） ;⑤结果判定及记录 “＋”表示红细胞完全凝集。红细胞凝集后完全沉于反应孔底层，呈颗粒状，边缘不整或锯齿状，而上层液体中无悬浮的红细胞。 “－”表示红细胞未凝集。反应孔底部的红细胞没有凝集成一层，而是全部沉淀成小圆点，位于小孔最底端，边缘水平。 “±”表示部分凝集。红细胞下沉情况介于“＋”与“－”之间。 新城疫病毒液能凝集鸡的红细胞，但随着病毒液被稀释，其凝集红细胞的作用逐渐变弱。稀释到一定倍数时，就不能使红细胞出现明显的凝集，从而出现可疑或阴性结果。;血凝试验（HA）;HA视频;用上述分离病毒制备4单位病毒，再用标准的阳性血清进行HI试验。 ①用微量移液器向1～12号孔中分别加入50μl生理盐水。 ②换一吸头取标准阳性血清50μl 置于第１孔中，挤压3～5次混匀，吸出50μl放入第二孔中，然后依次倍比稀释至第10孔，并将第10 孔的液体混匀后取50μl弃去。第11孔为病毒对照，第12孔为盐水对照。 ③用微量移液器吸取稀释好的4个血凝单位的病毒抗原，向1～11孔中分别加50μl。然后，振荡1min，将反应板置室温下作用20min， 或在37℃恒温培养箱中作用5～10min。 ④取出血凝板，用微量移液器向每一孔中各加入1％红细胞悬液50μl，再将反应板置于微型振荡器上振荡15～30s，混和均匀。 ⑤将反应板置37℃ 温箱中作用15～30min 后取出，观察并记录结果。; ⑥结果判断和记录 “－”表示红细胞凝集抑制。高浓度的新城疫抗体能抑制新城疫病毒对鸡红细胞的凝集作用，使反应孔中的红细胞呈圆点状沉淀于反应孔底端中央，而不出现血凝现象。 “＋”表示红细胞完全凝集。随着血清被稀释，它对病毒血凝作用的抑制减弱，反应孔中的病毒逐渐表现出血凝作用，而最终使红细胞完全凝集，沉于反应孔底层，边缘不整或呈锯齿状。 “±”表示不完全抑制。红细胞下沉情况介于“－”与“＋”之间。 如果待检抗体被标准阳性血清所中和，则确诊为NDV。;血凝抑制试验（HI）;HI视频;课后作业