高效液相色谱法教学【全】.ppt

高效液相色谱法; 前言:;我国：;课时安排： 第一章：高效液相色谱的基本原理 4学时 第二章：高效液相色谱的仪器装置 2学时 第三章：液固、键合相色谱 3学时 第四章：离子交换色谱和离子对色谱 3学时 第五章：凝胶渗透色谱 1学时 第六章：实验技术和辅助实验技术 1学时 复习 1学时 ;参考书籍：;§1－1 概述一、色谱法 ;液相色谱仪;;二、色谱法原理;分离原理:;三、高效液相色谱法的特点;高速: 分析时间较经典液相色谱少得多（交换速度快），一个复杂样品的分析仅需几分钟到几十分钟。 ;高灵敏度 ①紫外检测器的最小检测量可达(10-9 g)； 荧光检测器的灵敏度可达（10-11g）。 ②所需试样很少；微升数量级 高选择性 可分离不同类型化合物和异构体，也可分析在性质上极为相似的化合物 (同位素、同分异构体、空间异构体、手性化合物）;高效液相色谱法的特性:;四、HPLC与GC区别;2．流动相的区别 GC：流动相为惰性，组分与流动相无相互作用 力，只与固定相有相互作用。 HPLC：流动相为液体，流动相与组分间有相互作用 力，参与和影响色谱分离. 对分离起主要作用。 3．操作条件差别 GC：加温操作 HPLC：室温；高压 说明：气相、液相地位同样重要 两种互补不足的色谱方法 灵敏度：气相﹥液相 应用范围：液相﹥气相;五、色谱法的分类;§１－２　基本概念 一、色谱图;色谱过程特点：;二、色谱参数 ;2.分配系数K;分配系数K 的讨论;3.容量因子k’ (capacity factor) ;4. 容量因子与保留时间的关系;5. 选择性系数α;色谱理论需要解决的问题？;§1-3 色谱柱的分离效率;;;理论塔板高度H;说明：;塔板理论的特点和不足：;(3)塔板理论无法解释同一色谱柱在 不同的流动相流速下柱效不同的 实验结果，也无法指出影响柱效 的因素及提高柱效的途径。;二.峰扩展和速率方程式;2. 速率方程式（范·弟姆特方程式）;A ─涡流扩散项;B/u —分子扩散项;C ·u —传质项;固定相传质原因： 进出固定相速度不同（固相，液相?? 减小措施：①使用薄的固定相层 ②小颗粒填料 移动相传质原因：迁移 滞留 减小措施 ①填装均匀紧密 　　　　 ②使用小颗粒填料和表面 多孔性填料 ;40;3. 速率理论的要点:;(3) 为色谱分离和操作条件选择提供了理论指导。阐明了流速和填料对柱效及分离的影响。 选择最佳条件，才能使柱效达到最高。 ;4.获得高柱效的几种方法：;5. 影响分离的因素与提高柱效的途径 液体的扩散系数仅为气体的万分之一，在高效液相色谱中,速率方程中的分子扩散项B/u较小，可忽略不计，即 H = A + C u;§１－４　分离度 (Rs);讨论：;;一．分离度的数学表达式：;对浓度不同组分而言：;二．分离度影响因素 ①峰的宽度（峰宽越小， Rs越大） 峰的宽窄主要反映了色谱分离的动力学特性 ②两峰的保留时间之差（△tR越大， Rs越大） 反映了色谱分离的热力学特性 分离度基本 关系式： ;四．控制分离度方法;例: 流动相极性变化对组分k’的影响;②更换色谱柱（改变N）;③改变选择性系数;五. 分离度控制的一般原则:;第二章 仪器装置 四大部件： 高压输液泵 进样器 高效分离柱 检测器 ;§2－1 高压输液泵 作用：向色谱柱输送一个连续、恒定的移动相。 一、对泵系统的要求 1.使用方便（易调节流量、过压保护等） 2.更换洗脱液容易、死体积小 3.有最大工作压力(20MPa，130MPa) 4.一定流量范围（直径小，流量小；速度快，流 量大。）（0.1~10ml/min) 5.流量稳定性好(流量噪声、流量波动、流量漂 移） 6.流量精度高;机械往复式柱塞泵的工作原理：;特点：;梯度淋洗装置;泵系统发展趋势;§2－2 色谱柱; 柱体为直形不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。减小填料粒度和柱径以提高柱效。;柱效的影响因素;§2－3 进样装置;§2-