高效液相色谱.ppt

第二十一章高效液相色谱;第一节 概述;; HPLC特点： 1、适用范围广 2、高效 3、高速 4、高灵敏度（主要用UV 5×10-10g/ml） 5、流动相选择范围宽 6、柱可以反复使用（可用1-2年） 7、流动组分易收集 8、安全;第二节 基本原理; H=A+Cμ ① 涡流扩散项：A=2λdp（λ-不规则因子 dp填充物直径） ② 传质阻抗项引起板高：C=Cm+Csm+Cs 由于目前大都使用数学键合相，以Cs可忽略。 a、引起部分：Hs= —忽略 Cs—常数与颗粒内空隙体积分数及容量因子有关。 dp填料直径 Ds—组分在固定相中扩散系数。 固定相的粒度dp对物质抗项也有影响;b、由流动相引起部分：Hm= , Hsm= , （Hsm—静态流动相物质阻抗项） Cm—流动相的物质阻抗系数，与填充物质结构有关 ∴HPLC的范氏方程： H=A+cu=2λdp+（ ）u Cs Csm (1) dp↓，H↓，n↑ (2) Dm↑，流动相粘度增大，H↓，n↑ (3) 要使λ↓，H↓填充要均匀。 ;2、柱外展宽： 进样器联结管边等死体积越小越好。 HPLC φ2-6mm 10-30cm 死体积约1ml 记：由H=A+Cμ，在HPLC中可近似认为板高与速成正比（直线关系）μ↑，H↑，n↓，为了兼顾柱效和分析速度，一般采用较低流速，多用1ml/min流量。;二、分离度及影响因素： 又可： 讨论如何由n、α、k 来改变R 1、 K↑， R↑ ， k最适宜范围1k5 ;2、改变α—变峰间距 α↑，↑R↑在GC主要通过改变固定相（∵载量一定），而在HPLC中，主要通过改变流动相。 3、改变n、n↑ a、减小题粒直径dp↓ b、提高装柱技术（均匀） c、流动相η↓（∵低粘度流动相可以增大Dm）（Dm 组分在流动相速扩散） d、线速度u↓（减小传质阻抗引起H） e、增加柱长L（但太长，柱压大，寿命短） ;第三节 各类HPLC法;一、液-固吸附色谱：LSC 1、机理：同前章，即组分分子与流动相分子争夺吸附剂表面的活性中心的能力不同而分离。通过Ka不同来达到目的的。在吸附色谱中，常用容量因子来讨论问题。 2、影响k的因素： 当柱与柱温（一般是室温）选定时，k与溶质与溶剂的性质有关。以硅胶吸附剂为例。 ①与硅胶亲和力大的溶质k大，tR大 ②控制溶剂的极性，可调整tR(常用多元体系流动相)溶剂 的极性愈大，洗脱力愈强，k ↓.tR↓);二、液-液分配色谱：LLC 分离机理同前几章：LLC 与液相色谱同样有正相色谱与反相色谱之分。 (一). 正、反色谱 正相 反相 固定相极性 大 小 流动相极性 小 大 流动顺序 极性小的组分先流出 极性大的组分先流出 ;∵反相主要用于分离非极性及中等极性各类分子型化合物。 正相色谱:固定相：氰基与氨基化学键合相 流动相：与以硅胶为固定相的吸附色谱选法一致。 反相色谱:固定相如：十八烷基键合相（ODS；orC18表示） 流动相：甲醇-水or乙腈-水 pH2-8 反相色谱是应用最广的色谱法，主要用于分离非极性至中等极性的各类分子型化合物。;三、反相离子对色谱：（RPIC） 把离子对试剂加入极性流动相中，被分析的离子在流动相中与离子对试剂（反离子）生成不带电荷的中性离子时，从而增加在非极性固定相中的溶解度，使分配系数增大，而改变分离效果。