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简述全内反射荧光显微术的原理和应用 简述全内反射荧光显微术的原理和应用 (Tota interna ref ection f uorescence microscopy TIRFM) 摘要：全内反射荧光显微术(Tota interna ref ection f uorescence microscopy TIRFM) 摘要：全内反射荧光显微术 , , 是利用全内反射产生的消逝波激发样品 使样品表面数百纳米厚的薄层内 是利用全内反射产生的消逝波激发样品 使样品表面数百纳米厚的薄层内 CCD 的荧光团受到激发，再用高灵敏度和高时间分辨率的摄像机 CCD 来捕捉 的荧光团受到激发，再用高灵敏度和高时间分辨率的摄像机 来捕捉 荧光并用计算机进行显像，从而实现对生物样品观测的一种新生技术。 荧光并用计算机进行显像，从而实现对生物样品观测的一种新生技术。 CCD 由于消逝波特点及CCD 的优势使全内反射荧光显微镜具有高信噪比和高 由于消逝波特点及 的优势使全内反射荧光显微镜具有高信噪比和高 时间分辨率，因此它在对单分子的动态观测具有很高的应用价值。本文 时间分辨率，因此它在对单分子的动态观测具有很高的应用价值。本文 将对全内反射荧光显微镜的原理及应用和发展展望作一个简要的介绍。 将对全内反射荧光显微镜的原理及应用和发展展望作一个简要的介绍。 关键词：全内反射 消逝波 衍射极限 单分子的动态观测 关键词：全内反射 消逝波 衍射极限 单分子的动态观测 人 人类自诞生以来不但在不断的改进 自己的生产工具，同时也在不断的改 引言： 类自诞生以来不但在不断的改进 自己的生产工具，同时也在不断的改 0 引言： 0 进自己观察世界和了解这个世界的工具，其间显微镜的制造应改说为人类 进自己观察世界和了解这个世界的工具，其间显微镜的制造应改说为人类 观察微观世界打开了一扇窗户，它可以称得上是人类观察认识世界上的一 观察微观世界打开了一扇窗户，它可以称得上是人类观察认识世界上的一 次革命。此后各种新的观察工具相继问世，使人类对微观世界的认识达到 次革命。此后各种新的观察工具相继问世，使人类对微观世界的认识达到 , 了空前的高度。但是传统的光学显微镜由于受到光瞳远场衍射效应的影响, 了空前的高度。但是传统的光学显微镜由于受到光瞳远场衍射效应的影响 , R 0. 61 /nsin , , R 0. 61 /nsin , 存在分辨极限 瑞利将之归纳为 ≥ λ θ 其中λ为成像光波波 存在分辨极限 瑞利将之归纳为 ≥ λ θ 其中λ为成像光波波 , nsin , NA , nsin , NA 长 θ为物透镜的数值孔径即 值，因此光学显微镜空间分辨极限～ 长 θ为物透镜的数值孔径即