克隆载体表达载体.ppt

克隆载体 表达载体 定义：可携带插入的外源DNA片段并可转入受体细胞中大量扩增的DNA分子。该分子中含有能够在受体细胞中自主复制的序列和筛选标记，常用于外源基因的克隆，如噬菌体或质粒。 通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体，在载体上插入合适大小的外源DNA片段，并注意不能破坏载体的自我复制性质。将重组后的载体引入到宿主细胞中，并在宿主细胞中大量繁殖。 克隆载体 克隆载体必须具备什么条件? 具有使外源DNA片段插入的限制性酶识别位点（外源性DNA能组入） 能将外源DNA导入到受体细胞并进行自我复制（能繁殖） 必须具有选择标记（能筛选出来） A C B 常用的克隆载体 质粒载体 病毒载体(噬菌体载体) 混合载体（由以上三类中的两种以上相互组合或与其他基因组DNA组合而成） 高质量的克隆载体所必须具备的一些特征： 拷贝数不能太低，以保证转化效率 应该有两个以上用来克隆外源DNA的单一的限制性内切酶识别位点； 应该有一个或多个易于检出的选择标记基因 1 2 3 专用载体 染色体定位整合载体 启动子探针载体 诱导型表达载体 组织特异性表达载体 反义表达载体 定义：在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件（如启动子、RBS、终止子等），使目的基因能够表达的载体。 包括原核表达载体和真核表达载体，可以是质粒、噬菌体或病毒等。典型的表达载体带有能使基因表达的调控序列，并在适当位置有可插入外源基因的限制性内切酶位点。 表达载体 常用细菌质粒进行构建，构建过程中运用限制性核酸内切酶切割出与目的基因相合的末端（多为黏性末端，也有平末端），采用DNA连接酶连接，导入生物体实现表达。标记基因可帮助识别质粒并检测是否成功整合到染色体DNA中。  表达载体四部分：目的基因、启动子、终止子、标记基因 表达载体必须具备的条件： 1.载体能够独立的复制； 2.应具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记，以利于外源基因的克隆、鉴定和筛选； 3.应具有很强的启动子，能被RNA聚合酶所识别； 4.应具有阻遏子，使启动子受到控制，只有当诱导时才能进行转录； 5.应具有很强的终止子，以使RNA聚合酶集中力量转录克隆的外源基因，同时使很强的终止子所产生的mRNA较为稳定； 6.所产生的mRNA必须具有翻译的起始信号，以便转录后能顺利翻译。