课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.ppt

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数;一、课题背景;3、常见的分解尿素的微生物; 要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等； 方法： ⑴抑制大多数微生物的生长 ⑵促进目的菌株的生长 结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过平板稀释等方法对它进行纯化培养分离。;15.0g;在此培养基中; 从肥沃、酸碱度接近中性的湿润土壤中取样。先铲去表层土3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。;[二]制备培养基 ;◆应在火焰旁称取土壤10g。 ◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行;㈣.取样涂布;1、显微镜直接计数：;血球计数板的结构 ;13;计数方法 ;2.间接计数法（活菌计数法） ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。 ⑵常用方法：稀释涂布平板法。;注意事项 ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平板中，经涂布，培养计算出菌落平均数。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。;菌落计数规则： 选择平均菌落数在30~300间的平板 1、只有一个稀释度符合，以该稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告； 2、有两个稀释度符合，取决于二者比值（高稀释度的菌落数除以低稀释度的菌落数的值） 1）若0.5≤比值≤2，以两稀释度的菌落数乘稀释倍数所得的值的均值报告。 2）若2≤比值或比值≤ 0.5，则取其中较少的菌落总数进行报告。 3、若所有稀释度的菌落平均数均大于300，则按稀释倍数最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告； 4、若所有稀释度的菌落平均数均小于30，则按稀释倍数最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告； 所有菌落数均不在30~300间，以最接近30或300的平均菌落数乘稀释倍数。;例次 ;1.在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。