- 1、本文档共61页,可阅读全部内容。
- 2、有哪些信誉好的足球投注网站(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
第十四章基因重组与基因工程Genetic Recombination and Genetic Engineering;二、细菌的基因转移与重组;(二)转化作用;(三)转导作用;发生在同源序列间的重组称为同源重组(homologous recombination),又称基本重组。是最基本的DNA重组方式,通过链的断裂和再连接,在两个DNA分子同源序列间进行单链或双链片段的交换。同源重组不需要特异DNA序列,而是依赖两分子之间序列的相同或类似性。 ;; 内切酶
(RecBCD);Holliday中间体; 由整合酶催化,在两个DNA序列的特异位点间发生的整合,称位点特异重组(site-specific recombination) 。;(二)细菌的特异位点重组;(三)免疫球蛋白基因的重排;由插入序列和转座子介导的基因移位或重排称为转座(transposition)。;piggyBac转座子的老鼠,
表达红色荧光蛋白;第 二 节 重组DNA技术;克隆羊技术;一、重组DNA技术相关概念 ;DNA克隆
应用酶学的方法,在体外将各种来源的遗传物质(同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA)与载体DNA接合成一具有自我复制能力的DNA分子——复制子,继而通过转化或转染宿主细胞,筛选出含有目的基因的转化子细胞,再进行扩增提取获得大量同一DNA分子,也称基因克隆或重组DNA (recombinant DNA) 。 ;(二)工具酶 表14-1;(二) 工具酶 ;限制性核酸内切酶的分类;限制性核酸内切酶的作用机制;Bam HⅠ;配伍末端;(三)目的基因;(四)基因载体; 克隆载体(cloning vector)
为使插入的外源DNA序列被扩增而特意设计的载体。
表达载体(expression vector)
为使插入的外源DNA序列可转录翻译成多肽链而特意设计的载体。; 理想的基因载体应具备下列条件:;1. 质粒 (plasmid);pBR322质粒载体图谱;pUC19质粒载体图谱;2. 噬菌体载体 ; λ噬菌体DNA改造系统
λgt系列(插入型,适用cDNA克隆)
EMBL系列(置换型,适用基因组克隆);二、重组DNA技术基本原理及操作步骤;图14-10 以质粒为载体的DNA克隆过程;(一)目的基因的获取;(三)外源基因与载体的连接;Bam HⅠ切割反应;2. 平端连接; 选择宿主细胞条件
安全宿主菌
限制酶和重组酶缺陷
处于感受态(competent) ; 1. 直接选择法
(1) 抗药性标记选择
(2) 标志??救(marker rescue)
(3) 分子杂交法
原位杂交
Southern印迹
2. 免疫学方法
如免疫化学方法及酶免检测分析等;重组DNA技术操作的主要步骤; 表达体系的建立
表达载体的构建
受体细胞的建立
表达产物的分离纯化;第三节 重组DNA技术与医学的关系;基因治疗(gene therapy)是向有功能缺陷的细胞补充相应功能的基因,以纠正或补偿其基因的缺陷,从而达到治疗的目的。;思考题;图14-2 接合作用;图14-4 转导作用;λ噬菌体的生活周期;;A插入序列:转座酶编码基因两侧连接反向末端重复序列(箭头所示) ;B转座子Tn3:含有转座酶、β-内酰胺酶及阻遏蛋白编码基因;C转座子Tn10:含四环素抗性基因及两个相同的插入序列IS10L;表14-1 重组DNA技术中常用的工具酶; 化学合成法获取目的基因;人DNA;mRNA ;5?;(插入失活法)
抗药性标记选择;组氨酸缺陷
型大肠杆菌; 图14-13 利用α互补原理筛选重组体pUC18;原位杂交;Southern印迹;9、 人的价值,在招收诱惑的一瞬间被决定。七月-21七月-21Wednesday, July 07, 2021
10、低头要有勇气,抬头要有低气。00:24:1200:24:1200:247/7/2021 12:24:12 AM
11、人总是珍惜为得到。七月-2100:24:1200:24Jul-2107-Jul-21
12、人乱于心,不宽余请。00:24:1200:24:1200:24Wednesday, July 07, 2021
13、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。七月-21七月-2100:24:1200:24:12July 07, 2021
14、抱最大的希望,作最大的努力。07 七月 202112:24:12 上午00:24:12七月-21
15、一个人炫耀什么,说明他内心缺少什么。。七月 2112:24 上午七月-
您可能关注的文档
- 第十三章丸剂生产技术.pptx
- 第十三章人生发展全程PowerPointPresen.pptx
- 第十三章供应链管理(SCM).pptx
- 第十三章分子生物学技术.pptx
- 第十三章分销策略.pptx
- 第十三章柱式采煤法.pptx
- 第十三章简单国民收入决定理论.pptx
- 第十三章财产清查.pptx
- 第十三章辞职辞退.pptx
- 第十三章进出口合同履行.pptx
- 2024年证券分析与咨询服务项目投资申请报告代可行性研究报告.docx
- 2024年铬酸酐项目资金申请报告代可行性研究报告.docx
- 2024年清洁胶项目资金申请报告代可行性研究报告.docx
- 2024年肉松饼项目投资申请报告代可行性研究报告.docx
- 2024年陆上泵项目资金需求报告代可行性研究报告.docx
- 2024年未硫化复合橡胶及其制品项目资金需求报告代可行性研究报告.docx
- 2024年精密温控节能设备项目资金筹措计划书代可行性研究报告.docx
- 2024年汽车覆盖件模具项目资金筹措计划书代可行性研究报告.docx
- 宋词行书钢笔字帖.pdf
- 我的暑假生活作文三年级300字10篇.pdf
文档评论(0)