多糖类药物的分析.ppt

* 当蛋白酶（FⅩa）从生色底物分裂出pNA时，发色物的产生量与剩余的酶量成正比，与肝素效价成反比。 405 nm测定。 * Bz：苯甲酰，Pip：哌啶酰， Tos：甲苯磺酰；对-硝基苯胺（pNA）。 酰胺分解法（amidolytic method）。 当蛋白酶从生色底物分裂出pNA时，发色物的产生量与剩余的酶量成正比，与肝素效价成反比。 。 405 nm测定。 * 抗Xa因子活性测定 以溶液吸收度和浓度的对数，照生物检定统计法中量反应平行线测定法计算出供试品的抗Xa因子活性 可信限率(FL%)不得大于10%。 ? ? ? ? ? * 单糖组成 糖苷键连接方式 糖苷键连接位置 * 1、水解方法 （1）、完全酸水解法 （2）、部分酸水解、碱水解 （3）、乙酰解 （4）、甲醇解 （5）、酶降解 2、鉴定 * 水解难易取决单糖性质及构型。 呋喃型戊聚糖较吡喃型己聚糖易水解，α型较β型易水解。 已聚糖一般用1 mol/L硫酸，70℃，8小时。 氨基葡聚糖为4 mol/L盐酸，100℃ 9小时。 * （2）、部分酸水解、碱水解 选择温和的条件水解多糖，使糖链中某种类型的键特异性地打断。 （3）、乙酰解 多糖经过乙酰解反应（醋酐、冰醋酸）可生成乙酰化单糖和寡糖 * 多糖链在80－100℃条件下与无水甲醇反应能将糖链变成组成单糖的甲基糖苷。 甲基糖苷能转化为三甲基硅醚衍生物或乙酰基衍生物，进行气相色谱分析。 * 分为外切糖苷酶和内切糖苷酶。 外切糖苷酶：切下多糖非还原末端的一个单糖，并对单糖组成和糖苷键有专一性要求。 内切糖苷酶可水解糖链内部的糖苷键，释放多糖链片断以利于结构分析。 * 气相色谱法 高效液相色谱法 气相色谱法与质谱分析连用 * 常用的衍生物有： 三甲硅烷（TMS）衍生物 三氟乙酰（TEA）衍生物 乙酰（AC）衍生物 甲基（Me）衍生物 * 红外光谱——糖苷键类型 确定吡喃糖糖苷键时，用红外光谱，在890cm-1处有特征吸收者，示有β-型糖苷键，在840cm-1处有特征吸收者，示有α-型糖苷键。 核磁共振谱——糖苷键（α型或β型）。 H-NMR谱中的化学位移δ5.4 和δ 5.1 ，有两个信号说明分子结构中的糖苷键为α型，如有δ 4.53说明有β型。 * （一）、高碘酸氧化、Smith降解 （二）、甲基化反应产物分析 （三）、乙酰解后质谱分析 * 原理： 选择性的氧化降解反应，能够作用于多糖分子中1，2—二羟基和1，2，3—三羟基，生成过碘酸氧化产物；此产物用硼氢化钠还原后，再用酸水解，生成相应的醛、甲酸。 室温下用稀无机酸水解还原产物。 * 1，2连接的糖苷键经高碘酸氧化后的产物用硼氢化钠还原得到稳定的多羟基化合物，再用稀盐酸水解，得到甘油及甘油醛。 方程式： * 1，3连接的糖苷键与高碘酸不起反应，经还原与水解后得到原来的单糖。 方程式： * 1，4连接的糖苷键经高碘酸氧化后的产物用硼氢化钠还原，用稀盐酸水解得到最终产物为赤藓醇和乙醇醛。 * 1，6连接的糖苷键经高碘酸氧化后的产物用硼氢化钠还原得到稳定的多羟基化合物，再用稀盐酸水解，得到甘油及乙醇醛。 * 原理：多糖经甲基化试剂作用使分子中的羟基甲基化，然后用甲酸和三氟醋酸水解，以气相色谱鉴定甲基化水解产物。 如多糖分子中带有支链，甲基化水解后可生成二甲基单糖。 * 原理：多糖经过乙酰化反应（醋酐、冰醋酸）生成乙酰化单糖和寡糖。 用氯仿抽提，蒸去氯仿，进行质谱分析。 分子离子峰如有二乙酰葡萄糖或二乙酰单糖碎片峰，表明有支链结构。 * 右旋糖酐，又称葡聚糖，是若干个葡萄糖脱水形成的聚合物。 微生物多糖，也是第一个工业化的微生物多糖，是由肠膜明串珠菌（Leuconostoc mesenteroides）发酵产生的。 产物的分子量很大，经水解后，用不同浓度乙醇多定分级沉淀，得到中、低、小分子量的右旋糖酐成品。 临床上使用的是平均分子量为16000~24000，32000~42000和64000~76000的右旋糖酐20、右旋糖酐40和右旋糖酐70，它们均是用做代血浆。 * 右旋糖酐的结构：它主要由葡萄糖（1→6）α-糖苷键连接而成，同时含有(1→3)α-和(1→4)α-糖苷键连接形成的分支结构。 右旋糖酐为白色无定形粉末，无臭、无味，易溶于热水。 右旋糖酐溶于水后形成有一定粘度的胶体溶液，在乙醇等有机溶剂中不溶。 * 右旋糖酐经碱性水解后产生葡萄糖，葡萄糖可使Cu2+还原为红色氧化亚铜沉淀。 操作方法：取本品0.2 g，加水5 ml溶解后，加氢氧化钠试液2 ml