沙门氏菌的检测鉴.ppt

沙门氏菌的检测鉴;设备和材料 ;3 培养基和试剂 ;A.1 缓冲蛋白胨水（BPW） A.1.1成份 蛋白胨10.0 g 氯化钠5.0 g 磷酸氢二钠（含12个结晶水）9.0 g 磷酸二氢钾1.5 g 蒸馏水1 000 mL pH 7.2±0.2 A.1.2 制法 将各成份加入蒸馏水中, 搅混均匀, 静置约10 min, 煮沸溶解, 调整pH, 高压灭菌121 ℃, 15 min。;A.2 四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液 A.2.1基础液 蛋白胨10.0 g、牛肉膏5.0 g、氯化钠3.0 g、碳酸钙45.0 g、蒸馏水1 000 mL、pH 7.0±0.2 除碳酸钙外, 将各成份加入蒸馏水中, 煮沸溶解, 再加入碳酸钙, 调整pH, 高压灭菌121 ℃, 20 min。 A.2.2硫代硫酸钠溶液 硫代硫酸钠（含5个结晶水）50.0 g, 馏水 加至100 mL, 高压灭菌121 ℃, 20 min。 A.2.3碘溶液 碘 片20.0 g、碘化钾25.0 g、蒸馏水 加至100 mL, 将碘化钾充足溶解于少许蒸馏水中, 再投入碘片, 振摇玻瓶至碘片全部溶解为止, 然后加蒸馏水至要求总量, 贮存于棕色瓶内, 塞紧瓶盖备用。 A.2.4 0.5％煌绿水溶液 煌绿0.5 g、蒸馏水100 mL 溶解后, 存放暗处, 不少于1d, 使其自然灭菌。 A.2.5牛胆盐溶液 牛胆盐10.0 g, 蒸馏水100 mL加热煮沸至完全溶解, 高压灭菌121 ℃, 20 min。 A.2.6 制法 基础液900 mL、硫代硫酸钠溶液100 mL、碘溶液20.0 mL、煌绿水溶液2.0 mL 牛胆盐溶液50.0 mL 临用前, 按上列次序, 以无菌操作依次加入基础液中, 每加入一个成份, 均应摇匀后再加入另一个成份。;A.3 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液 A.3.1成份 蛋白胨5.0 g 乳糖4.0 g 磷酸氢二钠10.0 g 亚硒酸氢钠4.0 g L-胱氨酸0.01 g 蒸馏水1 000 mL pH 7.0±0.2 A.3.2 制法 除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸外, 将各成份加入蒸馏水中, 煮沸溶解, 冷至55 ℃以下, 以无菌操作加入亚硒酸氢钠和1 g/L L-胱氨酸溶液10 mL（称取0.1 g L-胱氨酸, 加1 mol/L氢氧化钠溶液15 mL, 使溶解, 再加无菌蒸馏水至100 mL即成, 如为DL-胱氨酸, 用量应加倍）。摇匀, 调整pH。;A.4 亚硫酸铋（BS）琼脂 A.4.1成份 蛋白胨10.0 g 牛肉膏5.0 g 葡萄糖5.0 g 硫酸亚铁0.3 g 磷酸氢二钠4.0 g 煌 绿0.025 g或5.0g／L水溶液5.0mL 柠檬酸铋铵2.0 g 亚硫酸钠6.0 g 琼 脂18.0 g～20 g 蒸馏水1 000 mL pH 7.5±0.2 A.4.2 制法 将前三种成份加入300 mL蒸馏水（制作基础液）, 硫酸亚铁和磷酸氢二钠分别加入20 mL和30 mL蒸馏水中, 柠檬酸铋铵和亚硫酸钠分别加入另一20 mL和30 mL蒸馏水中, 琼脂加入600 mL蒸馏水中。然后分别搅拌均匀, 煮沸溶解。冷至80 ℃左右时, 先将硫酸亚铁和磷酸氢二钠混匀, 倒入基础液中, 混匀。将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠混匀, 倒入基础液中, 再混匀。调整pH, 随即倾入琼脂液中, 混合均匀, 冷至50 ℃～55 ℃。加入煌绿溶液, 充足混匀后立刻倾注平皿。;注: 本培养基不需要高压灭菌, 在制备过程中不宜过分加热, 避免降低其选择性, 贮于室温暗处, 超出48 h会降低其选择性, 本培养基宜于当日制备, 第二天使用。;A.5.2 制法 将前面七种成份溶解于400 mL蒸馏水内作为基础液;将琼脂加入于600 mL蒸馏水内。然后分别搅拌均匀, 煮沸溶解。加入甲液和乙液于基础液内,调整pH。再加入指示剂,并与琼脂液合并,待冷至50 ℃～55 ℃倾注平皿。 注:①本培养基不需要高压灭菌, 在制备过程中不宜过分加热, 避免降低其选择性。 ②甲液配制 硫代硫酸钠34.0 g 柠檬酸铁铵4.0 g 蒸馏水100 mL ③乙液配制 去氧胆酸钠 10.0 g 蒸馏水 100 mL ④Andrade 指示剂酸性复红 0.5 g 1mol/L氢氧化钠溶液 16.0 mL 蒸馏水 100 mL 将复红溶解于蒸馏水中,加入氢氧化钠溶液。数小时后如复红褪色不全,再加氢氧化钠溶液1 mL～2 mL。;6、木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂 A.6.1成份 酵母膏3.0 g L-赖氨酸5.0 g 木糖3.75 g 乳糖7.5 g 蔗糖7.5 g 去氧胆酸钠2.5 g 柠檬酸铁铵0.8 g 硫代硫酸钠6.8 g 氯化钠5.0 g 琼脂15.