MRM定量技术单课件资料.pdf

MRM目标小分子定量 华大采用世界先进的 MRM质谱平台 QTRAP5500系统，可同时快速、精确测定样本中 多种目标小分子的含量。 1. 应用 临床研究——大量血样尿样中多种生物分子指标测定，适于 biomarker 筛选，致病 机理研究 药代动力学研究——定量测定临床人体血浆样本 / 临床前实验动物血液样本中药物 及其代谢产物浓度 检验检疫——大量样本中待测分子的流水线式检测 生物小分子定量分析——动植物，人类样本中多种感兴趣分子（及蛋白）的同时测 定 2. 技术优势 灵敏度高： 通过两级离子选择，排除大量干扰离子，使质谱的化学背景降低，目标 检测物的信噪比显着提高，从而实现检测的高灵敏度；低至 amol。 重现性好： 质谱信号重现性差在一定程度上是因为复杂生物样本基体和共流出组分 对待测分子离子化、质谱信号的抑制及源内碰撞碎裂过程的影响导致，而在 MRM技 术质谱信号采集中，后两者的影响被大大降低，因此重现性也相应提高； 准确度高： 利用 MRM技术的特异性，进行连续增强的离子扫描分析（ EPI），得到高 分辨的串联质谱 (MS/MS)碎片数据，与全扫描和中性丢失质谱扫描模式相比降低了 分析过程中定性结果的假阳性率，保证了分析的准确度； 通量高： MRM技术每个工作循环能处理多达 300 对母离子 - 子离子对。 特异性高 ：利用 SelexION 技术（离子淌度差分质谱分离技术） ，可为高灵敏度的定 量与定性分析提供更多一维的选择性 ，适合分离同分异构体、 色谱分离流出杂质以及消除高背 景噪音的多种应用。 3. 原理 MRM技术基于三重四级杆质谱原理，通过第一重四级杆（ Quadrupole,Q1) 检测到具 有特异性的母离子，然后第二重四级杆 (Q2) 只将选定的特异性母离子进行碰撞诱导 (collision-induced) ，最后去除其他子离子的干扰，通过第三重四级杆 (Q3) 对选 定的特异子离子进行质谱信号的采集。通过母子离子对的选择，去除干扰离子，对 目标小分子进行定性，定量分析。 原理图： 4. 技术路线 样本分析 方法建立 目标化合物标准品 5. 送样要求 样本处理 母子离子对选择 标准品要求 ： 质谱上机 1. 客户自行提供标准品，请注明所用的溶剂、浓度、体积等信息；建议 1-10ug/ml. 优化质谱中与化合 方法建立成 2. 若不能提供纯度大于 98%的标准品，需要提供目标分子的有效含量大于 10ug 的样品 . 样品要求 ： 信息分析， 数据产出 1. 生物体液（血浆、血清、尿液等） MRM方法→液质联 血浆为采用肝素类抗凝剂抗凝后， 除去血细胞的液体。 血清为血液凝固后的上清液。 尿液需新鲜，未作任何处理。样本均需采集后，立即置入‐ 80 °C 低温冷冻保存。 每个样品总体积不低于 200 μL, 尿液建议 5 ‐10mL。 2. 组织（植物、动物以及昆虫等） 样品均需新鲜采集后，立即置入液氮中低温冷冻保存；每个样品总重量不低于 100mg。 3. 微生物 样品必须为