MMFSCNG食品中胆固醇的测定方法.pdf

MM_FS_CNG_0356食品 胆固醇 分光光度法 MM_FS_CNG_0356 食品中胆固醇的测定方法 1. 适用范围 本方法适用于各类动物性食品中胆固醇的测定。 2. 原理概要 当固醇类化合物与酸作用时，可脱水并发生聚合反应，产生颜色物质。因此 可先对食品样品进行提取和皂化， 用硫酸铁铵试剂作为显色剂， 测定食品中胆固 醇的含量。 3. 主要试剂和仪器 . 主要试剂 石油醚； 无水乙醇； 浓硫酸； 冰乙酸：优级纯； 磷酸； 胆固醇标准物质； 胆固醇标准液； 胆固醇标准储备液（ 1mg／mL）：精确称取胆固醇 100mg，溶于冰乙酸中，并 定容至 100mL。此液至少在 2 个月内保持稳定； 胆固醇标准常备液（ 100 μg ／mL）：吸取胆固醇标准储备液 10mL，用冰乙酸 定容至 100mL。此液用时临时配制； 铁矾显色剂； 铁矾储备液：溶解硫酸铁铵 [ FeNH4 （SO4 ）2 ·H2O]于 100mL85％磷酸中，贮于 干燥器内，此液在室温中稳定； 铁矾显色液：吸取铁矾储备液 10mL，用浓硫酸定容至 100mL。贮于干燥器内， 以防吸水； 50％氢氧化钾溶液：称取 50g 氢氧化钾，用蒸馏水溶解，并稀释至 100mL； 5％氯化钠溶液：称取 5g 氯化钠，用蒸馏水溶解，并稀释至 100mL； 钢瓶氮气：纯度％。 . 仪器 实验室常用设备； 721 型分光光度计； 电热恒温水浴； 电动振荡器； 具玻塞试管：体积 10mL、25mL。 4. 过程简述 . 胆固醇标准线 吸取胆固醇标准常备液、 、、、分别置于 10mL试管内，在各管内加入冰乙酸使 总体积皆达 4mL。沿管壁加入 2mL铁矾显色液， 混匀，在 15～90min 内，在 560～ 575nm波长下比色。 以胆固醇标准浓度为横坐标， 吸光度值为纵坐标做标准曲线。 . 样品测定 食品脂肪的提取与测定 根据食品种类分别用索氏脂肪提取法、研磨浸提法和罗高氏法提取脂肪。并 计算出每 100g 食品中的脂肪含量。 食品胆固醇的测定 将提取的油脂 3～4 滴（约含胆固醇 300～500 μg），置于 25mL试管内，准 确记录其重量。加入 4mL无水乙醇， 50 ％氢氧化钾溶液，在 65℃恒温水浴中皂 化 1h。皂化时每隔 20～30min 振摇一次使皂化完全。皂化完毕，取出试管，冷 却。加入 3mL 5％氯化钠溶液， 10mL 石油醚，盖紧玻塞，在电动振荡器上振摇 2min，静置分层（一般约需 1h 以上）。 取上层石油醚液 2mL，置于 10mL具玻塞试管内，在 65℃水浴中用氮气吹干， 加入 4mL冰乙酸， 2mL铁矾显色液，混匀，放置 15min 后在 560～575nm波长下 比色，测得吸光度，在标准曲线上查出相应的胆固醇含量。 5. 结果计算 m×V×c 1 X＝ × V m 1 × 1 1000 式中： X——样品中胆固醇含量， mg／100g； m——测得的吸光度值在胆固醇标准线上显示的胆固醇含量，μ g； V——石油醚总体积， mL； V1——取出的石油醚体积， mL；