MMFSCNJ出口大豆饼粕脲酶活性测定方法pH增值法盐酸中和法.pdf

MM_FS_CNJ_0315出口大豆饼粕 脲酶活性 pH 增值法 盐酸中和法 MM_FS_CNJ_0315 出口大豆饼粕脲酶活性测定方法 pH增值法、盐酸中和法 1. 适用范围 本方法适用于大豆饼粕类脲酶活性的测定。 2. 方法一 . 术语 脲酶活性：在规定的操作条件下，使试样中的脲酶分解尿素释放出氨基氮， 以溶液 pH值的变量表示。 . 原理概要 将研细的试样与缓冲尿素溶液混合，在 30℃作用 30min 后，测定溶液的 pH 值。 . 主要试剂和仪器 主要试剂 2 4 2 4 磷酸缓冲溶液：将 KH PO和 K HPO溶解并稀释至 1000mL。临用前，以强酸 或强碱调节其 pH至，其使用期限不超过 90d； 缓冲的尿素溶液：溶 15g 尿素（ NHCONH）于 500mL磷酸缓冲溶液中。加入 2 2 5mL甲苯，用于防腐和防止霉菌生长。按上法调节其 pH至。 仪器 分析天平：感量； 研磨器：易于清理，研磨过程中不发热，并能达到要求的磨粉细度； 恒温水浴：能控制于 30±℃； pH 计：备有玻璃电极和甘汞电极，灵敏度不低于±单位，同时附有温度补 偿； 试管：直径 22mm，长 150mm，具橡胶塞； 烧杯：容量 10mL； 单刻度移液管： 10mL； 精密计时器； 标准筛。 . 试样的制备 用研磨器将约 10g 的样品，在不升高温度的条件下尽可能研细，使其通过 60 目标准筛的量不少于 60％。收集全部磨碎物于广口瓶中，小心混合并立即进 行分析。 . 过程简述 准确称取试样，放入试管内，加 10mL缓冲的尿素溶液，塞好橡胶塞，混匀。 置于 30 ±℃水浴中，记下时间。 隔 5min 放入第二个与此相同的试管作重复试验。 另称试样，放另一试管内，加 10mL磷酸缓冲溶液，塞好橡胶塞，混匀，作为空 白试验。与上管间隔 5min 置于同一水浴中。 在消化过程中，每隔 5min 将试管内容物都摇匀一次。每个试管都在消化 30min 后，从水浴中取出，倒出上清液于小烧杯中。 并在从水浴中取出后恰好 5min 时，测定 pH值读数。 注意：pH计测定前须预热 30min 以上，玻璃电极须在蒸馏水中浸泡活化 24 h 以上，方可使用；防止所有玻璃容器或电极的污染。如果 pH计不能迅速给出稳 定的读数， 即应查清故障。 甘汞电极的多孔组织如蒙上了大豆的可溶性成分， 常 可引起偶然故障。 . 结果计算 将主体试验的 pH值减去空白试验的 pH值，其差值作为脲酶活性。 . 允许差 对于蒸熟的或未经蒸熟的产品来说， 同一实验室内的双试验结果允许差各自 为和单位。 3. 方法二 . 术语 脲酶活性： 指在下述操作条件下， 试样的脲酶分解尿素释放氨基氮的量， 以 每克样品每分钟释放的氨基氮的毫克数表示。 . 原理概要 将研细的试样与缓冲尿素溶液混匀，在 30℃静置 30min 后，加入过量盐酸 溶液中和所释放的氨，然后用氢氧化钠标准溶液反滴。 . 主要试剂和仪器 主要试剂 缓冲尿素溶液： ～。将二水磷酸氢二钠 （Na