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分子诊断的临床应用 基因分析，即基因诊断 ( Gene Diagnosis )： 是利用 DNA 分析技术直接 从基因水平 ( DNA or RNA ) 检测遗传病的基因缺陷。 这种方法和传统的诊断方法主要差别在于直接从基因型推断表型，可以越过基因 产物，直接检测基因的结构而作出诊断，改变了传统的表型诊断方式，所以又称 为逆向诊断 ( Reverse Diagnosis )。 基因诊断的优点： 材料容易获得，不受细胞类型的限制； 不受基因表达的时空限制。 不受年龄的限制； 可以于发病前做出诊断； 方便有效，迅速准确，携带者也可以有效检出。 基因诊断的难点：对大多数疾病尚未找到合适的基因诊断方法，另外由于遗传异 质性、基因突变的多样性，一种基因诊断方法对同一疾病往往有很大差异。 基因诊断的对象：一般是指单基因病和某些有主基因改变的多基因病。 至 1997 年，发现人类单基因病遗传病已达 8587 种，现已达到 15988 种 进行基因诊断必须具备的条件： (1)致病基因的染色体定位已明确 (2)致病基因的结构、顺序与突变性质巳清楚 (3)致病基因与 DNA 多态存在连锁关系 根据所具备的条件选择适合的基因诊断技术 基因诊断方法 目前常用的基因诊断方法: (1)聚合酶链反应 DNA 扩增法 (2)限制性酶谱 Southern 印迹杂交直接分析法 (3)限制性片段长度多态性(RFLP)连锁分析法 (4)寡核苷酸探针 (oligonucleotide probe)检测法 (5)DNA 测序 (6)基因芯片 一、基因检测在感染性疾病中的应用 （一）肝炎病毒基因的检测 1、临床价值主要体现在： 病情评估 血清中病毒含量的多少与肝脏病理损害程度相关，病毒载量越高，肝组织炎症 反应程度越重。 疗效预测 治疗前病毒核酸载量越高，疗效越差；载量越低，机体清除病毒的可能性越大。 预后判断 病毒核酸载量持续处于高浓度者预后不良。 垂直传播途径感染者，预后较差。 反映肝细胞损害的其它指标正常，但病毒核酸 水平经常波动者更易发展为肝硬化。 2、乙肝HBV-DNA 定量检测的临床诊断意义 荧光定量 PCR:为乙肝病毒的检测诊断提供了新手段，大量临床标本测定结果证 明，其特异性为100％，灵敏度可达0.01f （10-12m ），相当于2.5 个乙肝病毒 颗粒。荧光定量 PCR 对下列情况更具有独特的诊断价值： 1）.治疗前进行病毒定量检测，可以指导选择对症药品，避免盲目用药。 2）.治疗后定量 PCR 可直接准确地测定体内病毒数量，有助于疗效的判断。 3）.怀孕前进行定量 PCR 测定，有助于选择有利的怀孕时机。乙肝孕妇进行定量 PCR 检查，有助于使部分病人得到及时、正确的诊断。 所以说 HBV-DNA 定量检测指标降低在乙肝治疗中有着非常重要的意义，是乙肝转 阴的前奏，也是康复最为关键的一步，只有体内的 HBV-DNA 定量指标降低，病毒 的复制繁殖才会停止，乙肝的彻底治愈才有希望。 一般以定量检测 103copies/ml 以下为阴性，以上为阳性。阳性提示体内病 毒复制活跃，血液中含量高，传染性较强；阴性则相反，病毒复制已得到抑制， 血液中含量底，传染性弱。 目前我国正在使用抗乙肝病毒药物包括干扰素类和核苷 （酸）类似物，这两大类 药物各有其优缺点。前者的优点是疗程相对固定，乙肝病毒 e 抗原和 e 抗体血清 学转换率较高，疗效相对持久，耐药变异较少，其缺点是需要注射给药，不良反 应较明显，不适于肝功能失代偿者。后者的优点是口服给药，抑制病毒作用强， 不良反应少而轻微，可用于肝功能失代偿者，其缺点是疗程相对不固定，乙肝病 毒 e 抗原和 e 抗体血清学转换率低，疗效不够持久，长期应用可产生耐药变异， 停药后可出现病情恶化。 2、病毒分型和耐药检测 各个编码区段存在着大量有意义的自然变异或药物诱导的变异，并由此产生不同 的变异株，从而导致 HBV 感染的不同血清学和临床表现。 检测 HBV 的变异株对了解疾病机制、药物耐受和指导用药有一定的价值。 根据 HBV 基因组核苷酸序列的差异，乙肝病毒可以分为 8 个基因型，分别命名为 A~H。我国的乙肝患者基因分型主要为A、B、C、D 四个型别，其中B 和 C 基因型 为优势基因型,分别占 30%和 60%。D 型基因主要分布在新疆地区。不同的基因分 型有着不同