正交实验法优选鱼腥草胰蛋白酶抑制剂的提取工艺.docVIP

正交实验法优选鱼腥草胰蛋白酶抑制剂的提取工艺 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：正交实验法优选鱼腥草胰蛋白酶抑制剂的提取工艺 1 1 仪器与试剂 2 2 方法 3 3 结果与方差分析 3 4 讨论 4 文2：正交实验法优选复方北芪口服液的提取工艺 4 1 材料与方法 5 2 结果 6 3 讨论 7 参考文摘引言： 7 原创性声明（模板） 8 文章致谢（模板） 8 正文 正交实验法优选鱼腥草胰蛋白酶抑制剂的提取工艺 文1：正交实验法优选鱼腥草胰蛋白酶抑制剂的提取工艺 Abstract:ObjectiveTo optimize the extraction procedure for trypsin inhibitor from Houttuynia cordata Thunb.．MethodsThe inhibition rate of trypsin activity was used as screening parameter, we employed the orthogonal design method to test the effects of four facto, including temperature of extraction solution (A), volume of extraction solution (B), pH value of extraction solution(C) and time of extraction (D), on the extraction of trypsin B performed the most significant effect on the extraction, and facto A and C came the next and factor D the last. ConclusionThe optimum extraction technology is A1B2C3D2 when the inhibition ratio of trypsin activity is coidered as preferential parameter. Key words:Houttuynia cordata Thunb.; Trypsin inhibitor; Orthogonal design 蛋白酶抑制剂（proteinase inhibitor, PI）是一类能够抑制蛋白水解酶活性的物质，广泛存在于动植物和微生物中［1］。其中胰蛋白酶抑制剂（Trypsin inhibitor, TI）具有重要的药用价值,对急性胰腺炎、肺气肿、抗休克、防治脑水肿和脑缺血等都有很好的临床 治疗 效果，还有研究表明对 HIV 和肿瘤的治疗也有重要意义［2］。因此，从传统中药中筛选具有TI活性的材料有很广阔的应用前景和市场价值。 鱼腥草为三白草科植物蕺菜Houttuynia cordata Thunb.的地上部分，具有清热解毒、消痈排脓、利尿通淋之功效，是临床应用极其广泛的中药之一［3］。本实验根据前期筛选的结果，利用鱼腥草为材料对从鱼腥草中提取TI的工艺进行优化，找出最佳的提取条件，为今后的 工业 化生产TI提供基础性数据。 1 仪器与试剂 试剂胰蛋白酶( 北京麒麟宏伟公司) 、大豆蛋白酶抑制剂（国药集团化学试剂有限公司）、苯甲酰DL-精氨酸对硝基苯胺（BAPNA）（上海三杰生物技术有限公司）、三-羟甲基-氨基甲烷、无水氯化钙、盐酸、三氯乙酸、氢氧化钠等为国产分析纯；鱼腥草。 仪器可见光分光光度计(7202B) 、离心机（LD-4） 、精密pH 计、水浴锅、精密 电子 天平（FA2004N） 2 方法 鱼腥草中胰蛋白酶抑制活性成分提取的正交实验设计根据 文献 ［4～6］及预实验结果，本实验采用双蒸水作为提取TI的溶剂。称取干燥的鱼腥草全草5 g，粉碎，在平行操作条件下，选用L9(34)正交实验表进行提取实验，以胰蛋白酶活性大小为指标，进行9次实验，每次实验重复3次（正交因素水平见表1），然后过滤并收集滤液，减压浓缩到100 ml。 表1 因素水平（略） 鱼腥草中胰蛋白酶抑制活性成分对胰蛋白酶的抑制率测定方法采用苯甲酰DL-精氨酸对硝基苯胺（BAPNA）法［7］：取胰蛋白酶液1 ml，加药材提取液1 ml在37℃水浴保温5 min，加入BAPNA溶液5 ml，37℃水浴保温10 min后，立即加1 ml三氯乙酸（30%）终止反应，用分光光度法在410 nm条件下测定吸光度。按下列公式 计算 样品提取液的抑制百分率：i=(Ar-Abr )-(As-