细胞工程研究常用设备和技术PPT课件.ppt

* * 八、培养箱 细胞在离体培养时，都需要一定的温度，尤其是哺乳动物细胞的要求较高，在多数情况下温度变化不能超过±0.5℃。 动物细胞培养 恒温培养箱包括能控制和调节温度的一般培养箱为增加了湿度和CO2调节的二氧化碳培养箱。 植物细胞培养 增加了照明条件的光照培养箱、人工气候箱。 * * * * 九、显微镜 体视显微镜（解剖镜）：用于观察和剥离较小器官和组织，也可用来观察愈伤组织的生长和发育。 * 透射显微镜：物镜在载物台上方，用于观察切片、压片、涂片等。 * 倒置显微镜：物镜在载物台下方，可以从培养皿、培养瓶或摇瓶的下方观察培养物，用来实时观察活细胞的生长情况。 * 显微操作系统：用于对细胞进行显微操作，如细胞核移植、染色体操作、显微注射、胚胎切割等工作。 * 第三节 基本技术 1．洗涤液 铬酸洗涤液是用重铬酸钾(K2Cr2O7)与硫酸(H2SO4)配制而成，可根据需要配制成弱、中、强三种。 一、洗涤技术 * 弱 用重铬酸钾50g加入蒸馏水1L，加热溶化，冷却后再缓慢加入浓硫酸90ml。 中 用重铬酸钾50g加入蒸馏水100ml，加热溶化，冷却后再缓慢加入浓硫酸875ml。 强 浓硫酸加热的同时缓慢加入磨碎的重铬酸钾，直到重铬酸钾达到饱和为止。一般浓硫酸1L加入重铬酸钾50g。 * 玻璃器皿洗涤 塑料用品洗涤 金属用品洗涤 2．洗涤方法 不同材料的器械，洗涤方法不同。 * 玻璃器皿洗涤 新的玻璃器皿上附有游离的碱性物质，其洗涤方法是用1%的HCl溶液浸泡24h，再用洗涤剂洗刷，然后用清水反复冲洗，最后用蒸馏水冲洗1～2次，干燥后即可使用。 已使用过的试管、烧杯、三角瓶等，先将器皿中的残渣除去，用清水洗净，再用洗涤剂洗刷，用清水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1～2次。 用过的吸管、滴管等内径狭小的玻璃制品，需先放入铬酸洗涤液中浸泡两小时以上，取出后经流水冲洗半小时左右，再用蒸馏水冲洗1～2次，然后烘干或晾干。 * 载玻片和盖玻片容易破碎，洗涤时不宜用力擦洗，其洗涤方法是先用清水冲洗，然后放入铬酸洗涤液中浸泡几小时或用稀铬酸洗涤液煮沸半小时，取出后用清水冲洗干净，将其储藏在95%的酒精中。 塑料用品洗涤：塑料用品一般用合成洗涤剂洗涤，因其附着力较强，因此冲洗时必须反复多次，最后用蒸馏水冲洗。 金属用品洗涤：金属用品一般不宜用各种洗涤液洗涤，需要清洗时，一般用酒精擦洗，并保持干燥。 * 二、灭菌和消毒技术 物理方法：干热、湿热、射线处理、物理除菌过滤、离心沉淀等； 化学方法：消毒剂、抗菌素灭菌； 培养基灭菌、玻璃器皿灭菌、金属用具灭菌、接种室灭菌、外植体灭菌。 * 几种常用消毒剂效果比较 * 第四节 培养基及其配置 用于植物离体培养的培养基至少包括无机盐；有机化合物；生长调节剂三大基本组成以及根据不同需要的其它附加成分。 * 一、无机盐类 必需元素在体内的生理作用主要包括四个方面： 组成各种化合物，参与机体的建造，成为结构物质； 构成一些特殊的生理活性物质，如植物激素、酶以及酶的活化剂，参与植物的代谢活动； 元素之间相互协调，以维持离子浓度平衡、胶体稳定、电荷平衡等生物电化学方面的作用； 发育过程中，影响组织器官的建成； * 二、有机化合物 糖类 既可作为C源，又可维持培养基的渗透压。植物组织培养中常使用蔗糖，在某些特殊培养类型中，亦使用麦芽糖、葡萄糖、果糖、纤维二糖、甘露糖等。 维生素 为了使培养物生长得更好，根据培养目的不同常在培养基中添加一种或多种维生素。常用的维生素包括VB1（盐酸硫胺素）、VB6（盐酸吡哆醇）、Vpp(烟酸)、VH (生物素)、VBc（叶酸）、VB5（泛酸钙）等。 * * 蒸馏冷凝法 离子交换：离子交换系统使用带电荷的树脂，利用正负电荷相互吸引的原理，去除水中的金属离子，离子交换系统需用酸和碱作定期再生处理。 * 反渗透（RO）：其原理是用一个半透膜，使高压水通过半透膜的办法来改善水的化学、微生物和内毒素等方面的指标。 4.5超滤： 超滤是利用透过膜技术，可除去水中的有机体和各种细菌，以及多数病菌和热原，过滤膜的孔径一般在0.1-0.01μm之间。与反渗透技术不同之处，超滤并不是靠渗透，而是靠机械法分离；与反渗透系统相似之处，超滤系统的效率取决于整个系统的配置及其它单元操作。 热原是微生物的代谢产物，大分子。　热原系指由微生物产生的能引起恒温动物体温异常升高的致热物质。它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等。这里所指的“热原”，主要是指细菌性热原，是某些细菌的代谢产物、细菌尸体及内毒素。致热能力最强的是革兰氏阴性杆菌的产物，其次是革兰阳性杆菌类，革兰阳性球菌则较