梅毒讲义(培训讲义).ppt

检验方法 1配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。2-编号：将样品对应微孔板按序编号．每板应设阴性对照3孔．阳性对照2孔和空白对照1 7L。f用双波长检测，可不设空白对照孔)。3．加样分别在相应孔中加入待测样品或阴性、阳性对照100 p 4．温育用封板膜封板后．置37±1。C温育60±2分钟。5洗板：小心揭掉封板膜．用洗板机洗涤5遍．最后一次尽量扣干。6加酶每孔加入酶标试剂100“l，空白孔除外。7．温育用封板膜封板后，置37±1。C温育30±1分钟。8．洗板操作同步骤5。9．显色：每孔加入显色剂A，B液各50 u I．轻轻振荡混匀，37土1~C避光显色30土1分钟10．测定：每孔加终止液50 u 1．轻轻振荡混匀．10分钟内测定结果。设定酶标仪波长于450nm处(建议用双波长450nm／600～650nm)．用空白孔调零点后测定各孔A值 参考值和检验结果的解释 【参考值】临界值(CUTOFF)计算：临界值=阴性对照孔A均值NC+018。【检验结果的解释l1．阴性对照孔A值≤0．10．阳性对照孔A值≥0．80。否则实验无效。2若有1 孔阴性对照A值大于0．1应舍弃．若两孔或两孔以上阴性对照A值大于0 1，应重复实验。3阴性判定? 样品A值临界值(CUTOFF)者为TP阴性。4阳性判定样品A值≥临界值(CUTOFF)者为TP阳性(注意初试阳性应重新取样双孔复试)。 局限性 【检验方法的局限性】1．本试剂检测的阳性结果必须结合临床信息进行分析。2．由于方法学原理的限制，本试剂检测结果阴性并不排除梅毒螺旋体感染的可能。3本试剂为定性试剂．不能作为定量试剂使用。4本试剂仅用于人血清或血浆样品的检测。 注意事项 1．本品仅用于体外诊断操作应按说明书严格进行。封板膜不能重复使用，不同批号酶标板、酶标试剂和阴性、阳性对照不可混用．不能与其它厂家试剂混用。2．避免在有挥发性物质及次氯酸类消毒剂（如84消毒液）的环境下操作。3使用前请将试剂平衡至室温（平衡30分钟以上)．实验前将试剂轻轻振荡混匀，使用后立即放回2～8C。未用完的微孔板条与干燥剂一起用自封袋密封2—8C保存。过期试剂请勿使用。4加液时必须用加样器．并经常校对加样器的准确性。加入不同样品或不同试剂组份时．应更换加样器吸头和加样槽，以防出现交叉污染。5．洗涤时各孔均需加满洗液．防止孔内有游离酶不能洗净。使用洗板机应设定30～60秒浸泡时间。在洗板结束后．必须立即进行下一步．不可使酶标板干燥。避免长时间的中断实验步骤，以确保每孔实验条件的均一。6．结果判定必须以酶标仪读数为准。读取结果时．应擦干酶标板底部．且孔内不能有气泡。不要触碰孔底部的外壁，指印或划痕都可能影响板孔的读值。7．所用样品．废液和废弃物都应按传染物处理。终止液为硫酸．使用时必须注意安全。8．显色时必须先加显色剂A液后再加显色剂B液．以免显色过低。9．由于ELISA反应原理的限制．本试剂检测阴性并不排除TP感染的可能。检测的阳性结果，必须结合临床信息进行分析。 梅毒血清反应的假阳性反应 （1）梅毒血清反应假阳性的分类 ①技术性假阳性反应 由于标本的保存不当（如细胞污染或溶血）、试剂质量差或过期、或实验室操作错误所造成。 ②生物学假阳性反应 是由于患者有其他疾病或生理状态发生变化，使梅毒血清试验出现阳性 （2）急性生物学假阳性反应 很多非梅毒螺旋体感染性疾病，如风疹、水痘、传染性单核细胞增多症、病毒性肝炎、上呼吸道感染、肺炎球菌性肺炎、亚急性细菌性心内膜炎、活动性肺结核、丝虫病和沟端螺旋体病等。 （3）慢性生物学假阳性反应 可持续6个月以上或数年，甚至终生。 梅毒血清学试验的结果解释 血清试验结果 临床意义 USR RPR TRUST VDRL TPHA TPPA FTA-ABS ELISA 一 一 一 排除梅毒,或一期梅毒的早期或艾滋病患者合并梅毒 + + + 现症梅毒﹙梅毒孕妇所生的婴儿除外﹚ + 一 一 生物学假阳性 一 + + 早期梅毒经治疗后 梅毒实验室操作要求 1． 实验室要求清洁明亮，温度保存在23～ 29℃。 2．仪器设备制定详细的操作说明书，定期维护。 3．玻璃器皿或耗材要清洁干净。 4．试验操作要适合工作需要，操作人员要持证上岗。 5．操作规程要确实可行，不得随意改变。 6. 认真精确操作标本和试剂，包括各种移液器和所操作的 用具量的准确。 梅毒实验室操作要求 7．定期检查说明书，操作保持与说明书的一致。 8． 每次试验设立阳性和阴性质控，包括反应性，介质和每次试验操作记录是否一致性； 9．标本不应溶血、乳糜状，应标记血