4.罗氏电化学发光原理.ppt

Cai,YuanhongStandard Slides cobas modular platform Roche Diagnostics, R. Zierg?bel, Version 2.0, July 2005 电化学发光免疫分析原理 杨明忠12/2014 第一页，编辑于星期二：十七点 三十分。 免疫检测技术的发展 电化学发光系统及其原理 电化学发光技术的优势 第二页，编辑于星期二：十七点 三十分。 免疫检测技术的发展 电化学发光系统及其原理 电化学发光技术的优势 第三页，编辑于星期二：十七点 三十分。 技术创新领先的免疫检测新技术－ECL 放免 酶免 荧光免疫 化学发光 电化学发光 1960‘S 1970~80‘S 2000‘S 1，抗体技术的革命，从使用多克隆抗体向使用单克隆抗体转变 2，从手工操作向全自动分析仪的转变 3，从液相放射免疫技术向均相和固相免疫分析技术的转变 第四页，编辑于星期二：十七点 三十分。 1959年Berson和Yalow建立了放射免疫分析方法（RIA），大大提高了免疫测定的敏感度，这种标记免疫测定开拓了医学检验的新领域 。 缺点 半衰期短，试剂货架期不长。 标记物不断变化，试剂批间、批内变化大，标准曲线不能保存。 反应时间长，操作步骤很难自动化。 使用放射性核素，对人体有一定的危害性。 分析的限度为 10 mol/ml 或 10 g/ml。 在一定时期内曾被采用，正在被逐步取代。 放射免疫测定法 第五页，编辑于星期二：十七点 三十分。 1971年Engvall和Perlman建立了固相酶免疫测定方法（ELISA），这种非放射标记免疫测定在临床检验，特别是感染性疾病的诊断中取得了广泛应用。 酶免疫测定法 缺点 试剂制备困难。 操作步骤复杂，耗时长。 影响因素多，质量控制难以保证。 最后测定的是颜色的光密度，其精密度和敏感性不如发光免疫技术。 各实验室操作不规范，质量难以保证。有学者认为ELISA技术已逐步走向退化，可能会逐步退出临床实验室。 第六页，编辑于星期二：十七点 三十分。 化学发光免疫测定法出现于20世纪90年代初。由于最后测定的是光子的量，不但对检测者无害，其敏感度和精密度均优于RIA，而且试剂较稳定，并可进行全自动分析。 化学发光免疫测定法 采用标记催化酶（如辣根过氧化物酶）或化学发光分子（如鲁米诺）的方法，其化学反应一般不稳定，为间断的、闪烁性发光，而且在反应过程中易发生裂变，导致反应结果不稳定。 检测时需对结合相与游离相进行分离，操作步骤多。 反应原理相对落后。 缺点 第七页，编辑于星期二：十七点 三十分。 电化学发光免疫技术 电化学发光免疫测定法（ECLIA）发展于 1996年，它在 发光反应中加入了电化学反应，是继放射免疫、酶免疫、 化学发光免疫测定之后的新一代标记免疫测定技术，是 电化学和免疫测定相结合的产物。 世界公认的 最先进 的临床免疫检测技术 第八页，编辑于星期二：十七点 三十分。 免疫检测技术的发展 电化学发光系统及其原理 电化学发光技术的优势 第九页，编辑于星期二：十七点 三十分。 Elecsys系列全自动免疫分析仪 1996年德国宝灵曼公司推出Elecsys 2010系统 世界上第一台 应用电化学发光技术的全自动免疫分析仪 1998年罗氏公司收购宝灵曼公司 2001年罗氏推出电化学发光免疫模块E 170 罗氏是全球唯一 应用电化学发光免疫技术制造仪器的厂商 2006年罗氏推出电化学发光免疫模块e601 2007年罗氏推出电化学发光免疫模块e411 第十页，编辑于星期二：十七点 三十分。 ECL 2010 disk E170 ECL 2010 rack e601 Elecsys系列全自动免疫分析仪 e411 disk e411 rack 第十一页，编辑于星期二：十七点 三十分。 电化学发光反应的原理 三联吡啶钌和三丙胺在电极表面发生的电化学发光反应 第十二页，编辑于星期二：十七点 三十分。 电化学发光原理 底物：三联吡啶钌[Ru(bpy)2+3] N羟基琥珀酰胺酯(NHS) 三丙胺(TPA) 在电极阳极表面，以上两种电化学活性物质同时失去电子发生氧化反应，2价的[Ru(bpy)2+3] 标记物被氧化成3价的[Ru(bpy)3+3] 的标记物，TPA被氧化成阳离子自由基TPA+* ， TPA+* 很不稳定，自发地失去一个质子而形成自由基TPA* ，其为强还原剂，将一个电子给3价的[Ru(bpy)3+3] ，使其成为激发态的Ru(bpy)2+3 ，而TPA自身被氧化成氧化产物