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word 细胞生物学实验报告 小鼠睾丸染色体的制备与观察 某某：杜旭 学号： 201100230155 系年级： 2011 级临七一班 同组者：赵伟 【实验目的】 ⒈了解小白鼠睾丸细胞染色体的形态与数目。 ⒉初步掌握小白鼠睾丸细胞染色体的玻片标本制作方法。 ⒊观察动物细胞染色体的数目和形态。 【实验原理】 ⒈制作染色体标本的先决条件： ⑴细胞具有旺盛的分裂能力〔①选择活跃的组织如睾丸、骨髓。②施加药物使细胞分裂如 ⑵设法得到大量中期细胞，秋水仙素处理。 日期： 2012/5/16 PHA〕 ⒉操作方法 利用睾丸细胞的制片技术虽然需要离心以与细致的操作，但其根本程序是简便的。在小鼠睾丸中，细 胞有丝分裂和减数分裂比拟旺盛，因此不需要体外培养就可以直接得到分裂中期细胞。通过小鼠睾丸得到 染色体比拟简便，一般不需要无菌操作。用秋水仙素作为有丝分裂的抑制剂。 由于小鼠睾丸细胞分裂活动旺盛，具有高度的分裂能力，本实验采用这一材料，通过前处理，低渗， 固定，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观察到许多处于分裂中期的染色体，可以进展染色体组型分 析。 减数分裂是细胞分裂染色体数目减半时发生在性细胞的形成过程中。哺乳动物在性成熟以后，精巢内 的性细胞总是在分批分期不断的成熟，因此，对哺乳动物的精巢进展一定的技术处理，随时都可以获得减 数分裂过程中各个时期染色体的标本。 用适量的秋水仙素溶液注入动物腹腔内，可以阻止分裂细胞纺锤丝的形成，从而积累大量处于分裂中 期的细胞。利用上述原理，通过常规的制片方法，观察小鼠睾丸细胞的染色体。 ⒊中期染色体的特征 ⑴突出在纺锤丝的牵引下，染色体的着丝点集中到细胞中央的道板上； ⑵DNA高度螺旋化。短粗的染色体清晰可见，染色体数目形态稳定，便于观察； ⑶由于染色体高度集中，造成纺锤体清晰可见。 通过本实验的结果看，本实验要想做的较好不太容易，需要娴熟的技术和耐心。 ◆染色体组型又名核型，是指根据染色体的长度、形态和着丝粒的位置将中期染色体依照所规定的标 准顺序和组次予以系统排列而成的模式图，它代表了一个个体或物种的染色体特征。进展染色体组型主要 依据有以下几个参数 : ① 相对长度 (relative length): 指单个染色体的长度与包括 X 染色体在内的单倍 体染色体总长度之比， 相对长度 =单条染色体的长度 /( 单倍体常染色体 +X 染色体 ) 的总长度× 100%。 ②臂指 数(arm index): 指染色体长臂与短臂的比率， 臂指数 =长臂/ 短臂。 ③ 着丝粒指数 (centromere index): 指 短臂占整个染色体长度的比率，着丝粒指数 =短臂/ 整个染色体长度× 100%, 该比率决定了着丝粒在染色体 1 / 3 word 中的相对位置。④染色体的臂数 : 对于端部着丝粒染色体，臂数为 1，其它为 2。根据 Levan(1964) 所制定 的人类染色体标准，臂指数在 1.0~1.7 之间的染色体为中央着丝粒染色体，在 1.7~3.0 之间为亚中央着丝 粒染色体， 在 3.0~7.0 间为亚端部着丝粒染色体， 大于 7.0 为端部着丝粒染色体； 之间的染色体为中央着丝粒染色体，在 37.5~25.0 之间为亚中央着丝粒染色体，在 部着丝粒染色体，小于 12.5 为端部着丝粒染色体。 着丝粒指数在 50.0~37.5 25.0~12.5 之间为亚端 ⒋原理分析 通过获取小鼠睾丸细胞〔分裂能力强〕 ，本实验采用这一材料，通过前处理，低渗，固定，制片，染 色等步骤制得染色体标本，可观察到许多处于分裂中期的染色体，可以进展染色体组型分析。一般观察有 丝分裂中期，染色体的形态最典型、最易识别和区分。因此，制备染色体标本获取的是中期细胞。 【实验用品】 ⒈材料 小白鼠 ⒉试剂 秋水仙素、 0.3% KCl 低渗液、固定液〔甲醇：冰醋酸 酸钠溶液 ⒊仪器 注射器、针头、解剖盘、解剖剪、镊子、玻璃吸管、 显微镜、擦镜纸、铜网 =3： 1〕、 Giemsa 染液、 0.9% 生理盐水、柠檬 10ml 刻度的离心管、离心机、载玻片、盖玻片、 【实验步骤】 ●预