降钙素原检测操作流程模板-试剂SOP文件-血清血浆_3752.docVIP

XXXXX医院检验中心 文件编号 版本号/修订号 降钙素原检测操作流程 总页数/页码 降钙素原检测操作流程 检验目的 检测血液中的PCT含量 2 检验程序的原理和方法 本试剂盒采用双抗夹心法原理，以两株高特异性、高敏感性PCT单克隆抗体，其中PCT单克隆抗体I固定在结合垫上，为量子点标记抗体，用于检测抗原；PCT单克隆抗体II包被在层析膜上形成检测线（T线），用于捕获抗体。为监控试纸是否有效，设置控制线（C线），为包被有兔抗鼠IgG抗体。应用抗原抗体反应和荧光量子点免疫层析技术，检测人血中PCT的含量。测试时，若样本中含有PCT，PCT首先与结合垫中标记有量子点的PCT单克隆抗体I结合，然后与硝酸纤维素膜T线处包被的PCT单克隆抗体II结合形成“夹心”结构。T线处荧光显色强度与PCT含量呈正比，根据荧光强度定量测定PCT浓度。 3 性能特征 3.1最低检出限：0.01ng/ml； 3.2线性范围：0.1ng/ml-100ng/ml，线性相关系数r≥0.990； 3.3精密度：批内差：CV ≤15%；批间差：CV≤20%； 3.4准确度（方法学对比）：检测浓度小于10ng/ml时， 结果误差在±20%内；检测浓度为10-100ng/ml时，结果误差在±15%内。 4 样品类型（如血清、血浆、尿液） 血清/血浆 5 患者准备 患者血液采集前，应避免跑步、骑自行车、爬楼等剧烈的运动，要求病人休息15分钟后进行采血，冬季保持血液循环通畅，化疗病人要求在化疗前采集样本，以保证检测结果准确，采血不能与静脉输液同侧臂。 6 容器和添加剂类型 不适用。 7 所需的仪器和试剂 1.试剂盒：降钙素原（PCT）定量测定试剂盒（量子点免疫荧光层析法）：内含50条单人份检测卡；每人份有检测卡、干燥剂、铝箔袋组成；检测卡由试纸条外壳和试纸条组成； 试纸条：样品垫、结合垫(固定量子点标记PCT抗体I)、层析膜（包被PCT单克隆抗体II）、吸水纸、PVC底板。 2.仪器：干式荧光免疫分析仪 （1）移液器（满足100微升）； 8 环境和安全控制 环境温度要求：10~30℃（最佳温度：25℃）。 环境相对湿度要求：≤70% 安全控制：本产品内含有作为防腐剂的叠氮钠，叠氮钠可以和排水管道的铜管或铅管放生反应，产生爆炸物质，须按照当地的有关条例妥善处理； 对于含有感染源或怀疑含有感染源的物质应有合适的生物安全保证程序，下列为有关注意事项： 戴手套处理样本或对试剂进行消毒； 用消毒剂对溅出的样本或试剂进行消毒； 按当地的有关条例和处理所有标本、试剂和潜在的污染物。 9 校准程序 校准程序：读取试剂盒的SD卡。 10 样本要求 10.1血清血浆样本要求 10.1.1血清血浆样本的要求： （1）用于人血清、血浆样本，其它体液和样本可能得不到准确的结果； （2）应在无菌情况下采集静脉血。检测时，未经枸橼酸钠或肝素抗凝的血样须析出血清，经枸橼酸钠或肝素抗凝的血样需离心得到血浆。 10.1.2血清血浆保存： 血清血浆采血完需要在两小时内检测完毕，2-8℃保存七天，保存样本不可用于重复检测。 10.1.3血清血浆注意事项： 血清血浆采集完需要观察样本状态，溶血、黄疸、脂血现象不应用于检测。 11 检验步骤 11.1血清血浆检测 a.采血后3-5min后再离心，3500r/min 离心 15min得到澄清透明状血清或血浆。 b.用移液枪加样，先将移液枪量程调为 100ul，再吸取 100ul 血清或血浆样本。 c.把 100ul 血清或血浆样本垂直加入检测卡加样孔中（注意：取样时移液枪先按到一档再插入液面下 2-3mm 取样，加样时把样本全部加入加样孔中）。 d.安装吸头，旋转安装法——移液器吸头锥垂直插入吸头，左右小幅度旋转，上紧即可。吸头安装不好会带来高达 5%的移液误差，甚至移液失败! e.吸液时先将移液枪按到一档，再将吸头浸入液面下 2-3mm，慢慢松开吸液，停留 2s，完成吸液操作。不正确的吸液速度会导致至少 5%的准确性下降! f.排液时下压活塞按钮至一档，略作停顿后，继续下压活塞按钮到达二档。正确的排液技术提高1%的移液准确性。排液结束后可弃掉吸头。 12 质量控制程序 冻干粉质控品 冻干粉质控品 质控品复溶（15min）及分装 仪器编好质控编号 取100ul质控品加入检测卡上机读卡 读取质控品SD卡 结果出来重新读取试剂SD卡 13 干扰和交叉反应 13.1吸管（或枪头）不可以混用，防止交叉污染。 13.2样本中的血红蛋白、甘油三酯和胆红素会干扰检测结果，其最大允许浓度分别为5g/L、10g/L和0.2g