高效液相色谱法说课文档讲课文档.pptVIP

现在一页，总共三十三页。 二、HPLC与GC差别 相同：兼具分离和分析功能，均可以在线检测 主要差别：分析对象的差别和流动相的差别 1．分析对象 GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品， 高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及 高聚物的样品不可检测 占有机物的20% HPLC：溶解后能制成溶液的样品， 不受样品挥发性和热稳定性的限制 分子量大、难气化、热稳定性差及高分子 和离子型样品均可检测 用途广泛，占有机物的80% 现在二页，总共三十三页。 续前 2．流动相差别 GC：流动相为惰性气体 组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用 HPLC：流动相为液体 流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、 改善分离度增加了因素，对分离起很大作用 流动相种类较多，选择余地广 流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用 选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相 可以增大分离选择性 3．操作条件差别 GC：加温操作 HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小） 现在三页，总共三十三页。 三、高效液相色谱仪流程图 1．贮液罐（滤棒，可滤去颗粒状物质） 2．高压泵（输液泵） 3．进样装置 4．色谱柱——分离 5．检测器——分析 6．废液出口或组分收集器 7．记录装置 现在四页，总共三十三页。 续前 四、HPLC的特点和应用 “三高” “一快” “一广” 高柱效——n=104片/米，柱效高（远高于一般LC） 高灵敏度 高选择性 分析速度快 应用范围广泛（可分析80%有机化合物） 现在五页，总共三十三页。 第二节 基本理论和条件选择 热力学理论：塔板理论——平衡理论 基础 动力学理论：速率理论——Vander方程 一、塔板理论 二、速率理论 三、HPLC法中分离条件的选择 现在六页，总共三十三页。 一、塔板理论 现在七页，总共三十三页。 二、速率理论（与GC对比） 1. 现在八页，总共三十三页。 续前 2）涡流扩散项及其影响 next 2. 讨论： 1）流动相流速对HPLC板高的影响（与GC对比）next 现在九页，总共三十三页。 图示 back 现在十页，总共三十三页。 续前 3）传质阻抗项及其影响 现在十一页，总共三十三页。 图示 现在十二页，总共三十三页。 三、HPLC法中分离条件的选择 1. 固定相与装柱方法的选择： 选粒径小的、分布均匀的球形固定相（dp≤10μm） 首选化学键合相，匀浆法装柱 2. 流动相及其流速的选择： 选粘度小、低流速的流动相——甲醇，1ml/min 3. 柱温的选择： 选室温250C左右 现在十三页，总共三十三页。 第三节 各类高效液相色谱法 一、液固吸附色谱法（LSC） 二、液液分配色谱法（LLC） 三、化学键合相色谱法（BPC） 现在十四页，总共三十三页。 一、液固吸附色谱法（LSC） 流动相为液体，固定相为固体吸附剂 1．分离机制：利用溶质分子占据固定相表面吸附活性 中心能力的差异 分离前提：K不等或k不等 现在十五页，总共三十三页。 续前 2．固定相：与LC比，固定相粒径不同（10μm） （2）高分子多孔小球：YSG 原理：吸附+分配 蒹小孔凝胶作用 特点：柱选择性好，峰形好，柱效低 适用：分离弱极性化合物 （1）硅胶 表孔硅胶（薄壳硅胶） 全多孔硅胶 无定形 YWG 5~6μm 5×104 球形 YQG 3~4μm 8×108 堆积硅珠 YQG 3~4 μm 8×108 理想 原理：吸附 特点：峰易拖尾 适用：分离极性化合物 现在十六页，总共三十三页。 续前 3．流动相：底剂（烷烃）