分子遗传学课件-遗传多态性.ppt

*;分子遗传学; 基因组多态性; DNA分子标记是DNA水平上遗传多态性的直接反映.DNA水平的遗传多态性表现为核苷酸序列的任何差异,哪怕是单个核苷酸的变异.因此,DNA标记在数量上几乎是无限的. ;DNA遗传标记特点： 1.直接反映基因特征，非推测。 2.基因座位数量多，无论表达与否。 3.多态性程度高，等位基因多，鉴别能力强。 4.适合于陈旧的样品，检测能力强。 5.灵敏度高，有利于微量样品的检测。 6.易于检测手段的自动化、标准化，重复性好。逐渐取代了蛋白质水平的检测方法。 ;DNA多态性的分类 1）长度多态性：等位基因片段长度的个体差 别。由一特定序列，首尾相连串联 重复次数不同产生的个体差别。 可变数目串联重复（variable number of tandem repeat,VNTR） 短串联重复(short tandem repeat,STR) A：产生原因：DNA滑动与同源染色体 不等交换。;2）序列多态性：DNA片段碱基排列顺序的个体差别。 单核苷酸多态性 （single ucleotidepolymorphism,SNPs） 原因：碱基的置换、插入、缺失。 特点：多位于非编码区，选择压力。 数量多，1/1000 bp，300万 二态性，2个等位基因，多态性 程度较低。 孤立事件，人类遗传学意义大。 ;DNA标记的分类;(2)基于PCR的DNA标记. 根据PCR所用的引物特点,这类DNA标记可分为随机引物PCR标记和特异引物PCR标记.随机引物PCR标记包括RAPD标记和ISSR等,随机引物PCR所扩增的DNA区段事先未知,具有随意性和任意性,因此随机引物PCR标记技术可用于对任何未知基因组的研究.特异引物PCR标记包括SSR标记和STS标记等,特异引物PCR所扩增的DNA区段事先是已知的明确的,具有特异性.因此特异引物PCR标记技术依赖于对各个物种基因组信息的了解.;;;基于遗传标记的发展历程;经典的遗传标记（蛋白质和免疫学的标记） ABO血型位点标记 HLA位点标记（人类白细胞抗原） 存在问题： 已知多态的蛋白质很少 等位基因的数目有限 无法获得足够的信息量 检测技术的繁琐等 —限制了人类基因组的遗传分析工作 —促使人们直接在DNA上寻找遗传标记;蛋??质和免疫学的标记;同工酶的多态性;遗传标记中的第一代标记;限制性片段长度多态性的DNA基础 （1） 识别部位的点突变：碱基的替换、修 饰（甲基化）或插入与缺失。 （2） 识别部位间的片段插入与缺失。 （3）?识别部位间的重复序列数目的变化。 ; DNA限制性内切酶 restriction endonuclease 能够识别特定的DNA序列，与DNA分子结合后在特定部位将DNA双链切断的核酸水解酶。 （1）生物学功能：水解核酸的磷酸二酯键。 （2）命名：根据微生物的种（第一个字母大 写）、属（前二个字母小写）、变种第一个 字母大写）、发现分离的顺序（罗马数字）。 （3）分类： A：Ⅰ型：远离识别部位随即切割，非特异。 B：Ⅱ型：在识别部位内部切割，特异。 C：Ⅲ型：在识别部位后定点切割，特异。 单位：1U：在标准条件下，1h完全水解1μgλ噬菌体的酶量。 ;Ⅱ型DNA限制性内切酶： A：识别核酸序列数目4-6个。 B：识别序列为回纹序列。 C：切割后产生的末端分为粘行末端与平 末端。 例：PstⅠ 5ˊ-C↓TGCAG-3ˊ 3ˊ-GACGT↑C-5ˊ HaeⅢ 5ˊ-GG↓CC-3ˊ 3ˊ-CC↑GG-5ˊ;精选ppt;分型法： RFLP标记是发展最早的DNA标记技术。 RFLP技术主要包括以下基本步骤： DNA提取　　　用限制性内切酶酶切DNA 、 　　　用凝胶电泳分开DNA片段　　　把DNA片段转移到滤膜上　　利用放射性标记的探针杂交显示特定的DNA片段（Southern杂交）和结果分析。 ;精选ppt;精选p