血红蛋白的分离和提取.pptx

1;思考： “课题1--DNA的粗提取与鉴定” 实验理想的材料是什么？ “课题3--血红蛋白的提取和分离”这实验理想的材料又是什么？原因是？;一、基础知识： （一）蛋白质分离原理 （二）蛋白质分离的方法 1）凝胶色谱法：又称分配色谱法 2）电泳法 （三）缓冲液的作用;二、实验操作－－实验步骤;;1.凝胶色谱法 ;3、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，（ ）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（ ），移动速度（ ），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（ ），移动速度（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。; 洗脱： 从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。 ;2．凝胶电泳法：;3）常用电泳方法 琼脂糖凝胶电泳 聚丙酰胺凝胶电泳 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 在测定蛋白质分子量时通常用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，使用时可选用一组已知分子量的标准蛋白同时进行电泳做对照，根据两者的电泳区带位置，利用相关计算公式算出相对分子量 SDS 带负电荷多的 ，因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷的差别，使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小。 ;影响蛋白质分子运动速度的因素;由弱酸和相应的强碱盐溶解于水中。 如H2CO3/NaHCO3，NaH2PO4/Na2HPO4等;血液组成成分;1.洗 涤 红 细 胞;2.释放血红蛋白;;;纯化－－凝胶色谱法;注意： （1）凝胶颗粒＋蒸馏水→充分溶胀；凝胶装填时尽量紧密；装填时不能有气泡存在：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。 ;3.样品的加入和洗脱;注意事项;知识总结;1、用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，关于蛋白质的叙述，正确的是 A、 相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对 分子质量较大的蛋白质 B、 相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对 分子质量较大的蛋白质 C、 相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对 分子质量较大的蛋白质 D、 二者根本无法比较;2.相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个; 3.凝胶色谱法分离蛋白质时，凝胶的种类较多，但其作用的共同点是( ) A.改变蛋白质分子通过凝胶时的路径 B.吸附一部分蛋白质，从而影响蛋白质分子的移动速度 C.将酶或细胞固定在凝胶中 D.与蛋白质分子进行化学反应，从而影响其移动速度 4.在利用凝胶电泳法分离蛋白质时，一定要加入缓冲液，其作用主要是( ) A.使酶的活性最高 B.使蛋白质的活性最高 C.维持蛋白质所带的电荷 D.使蛋白质带上电荷;5、使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于 A 电荷的多少 B 分子的大小 C 肽链的多少 D 分子形状的差异 ; 6.下列是有关血红蛋白提取和分离的相关操作，其中正确的是（ ） A．可采集猪血作为实验材料 B．用蒸馏水重复洗涤红细胞 C．血红蛋白释放后应低速短时间离心 D．洗脱液接近色谱柱底端时开始收集流出液;8.在装填凝胶柱时，不能有气泡存在的原因是 A、气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱 次序，降低分离效果 B、气泡阻碍蛋白质的运动 C、气泡与蛋白质发生化学反应 D、气泡在装填凝胶的时候，使凝胶不紧密;9.样品的加入和洗脱的操作不正确的是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 A、加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面 B、加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内 C、等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口 D、用吸管小心的将1ml透析后的样品加到色谱柱的顶端，不要破坏凝胶面