甘精胰岛素含量的检测方案.pdf

甘精胰岛素含量的检测方案 一、设计背景 甘精胰岛素 （In su Iin glarg ine）是一种由重组DNA技术在大肠杆菌 中成功 表达的具有长效作用的人胰岛素类似物。根据相关的临床药理学相关研究表明，静脉 注射等剂量的甘精胰岛素和重组人胰岛素，其中效价是差不多的。像所有的胰岛素一 样，甘精胰岛素的作用时程可能受体力活动和其他因素的影响。对健康人体及 型糖I 尿病患者的正常血糖钳夹相关研究表明。在皮下注射甘精胰岛素的起效时间比人精蛋 白锌中性低精蛋白锌重组人胰岛素；相对比较胰岛素慢些，但是甘精胰岛素的作用与 特性为稳定和无峰值、有更好的保证时效。胰岛素受体结合：在胰岛素与其受体结合 的动力学方面，甘精胰岛素同人胰岛素极为相似。因此可以认为它与经由胰岛素受体 而介导胰岛素的作用相同。胰岛素，包括甘精胰岛素，其主要作用是调节糖代谢。胰 岛素及其类似物是通过促进骨骼肌和脂肪等周围末梢组织摄取葡萄糖、抑制肝葡萄糖 的产生而降低血糖的。胰岛素抑制脂肪细胞内的脂解、抑制蛋白水解和促进蛋白质合 成。临床药理学的研究表明，静脉注射等剂量的甘精胰岛素和人胰岛素，其效价是相 同的。像所有的胰岛素一样，甘精胰岛素的作用时程可能受体力活动及其他因素的影 响。对健康人及I型糖尿病患者的正常血糖钳夹研究表明。皮下注射甘精胰岛素的起 效时间比人精蛋白锌中性低精蛋白锌人胰岛素 （NPH）胰岛素慢，但甘精胰岛素的作 用特性为平稳、无峰值、作用时间长 甘精胰岛素是重要的内分泌激素之一，其中主要的生理作用是由全面地调节糖类 代谢，同时也相应地调节脂肪和蛋白代谢。正常情况下由于神经系统的调节和激素的 相互维持作用下，血液中甘精胰岛素在浓度是较稳定的。要是给正常的动物注射甘精 胰岛素，可造成重组人胰岛素性低血糖症状。血糖浓度持续降低而出现交感神经兴奋 性增高和脑功能障碍症群而导致的综合症就是低血糖休克。在实验条件下如果给动物 注射过量的胰岛素，使动物体内胰岛素量骤然升高，可造成动物实验性低血糖，会使 神经组织的正常代谢功能发生障碍，以至产生痉挛昏迷状况，在外部表现为惊厥，称 之为胰岛素休克。小鼠的低血糖休克实验属于经典实验传统的甘精胰岛素休克实验目 的是观察人工胰岛素性低血糖休克以和注射葡萄糖后的消失过程，以加深对甘精胰岛 素生理作用的理解但实验中一般不测定小白鼠血糖的变化，只是观察甘精胰岛素造成 低血糖休克时的行为变化。 二、设计依据 高效液相色谱法是将其中具有一定极性的单一溶剂或不同比例的混合有机溶液 作为流动相，用泵将配好的流动相注入装有填有十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色 谱柱，注入的供试品被流动相带入色谱柱柱内进行分离后，各成分先后进入检测系统 当中，用积分或者数据处理系统记录数据处理，得到测定的结果。采用外标法来检测 甘精胰岛素含量时，被检测的样品通过相关处理后配制成相应溶液，处理后的供试品 注入液相色谱仪中从而各自成分被分离与检测。外标法的最大优势就是无需校正因 子，相对比较适合大规模的样品检测。 （检测标准：中国药典） 根据2020 年版 《中国药典》第四部通则 “胰岛素纯度与含量测定法”第二法， 2020 对甘精胰岛素进行溶出度的测定，然后参照《中华人民共和国药典》 版第四部通 则0512 高效液相色谱法试验，将制备的供试品溶液放入高效液相色谱仪进行溶出测 定，测定六个时间点的溶出度，依据各个时间点的溶出数据绘制溶出曲线，对溶出曲 线进行分析，最后确定甘精胰岛素的最佳溶出时间点。 三、检测方案 1.检测仪器及试剂、检验品 仪器：安捷伦1260高效液相色谱仪、XSE205 电子天平、PE20型pH计、超声波 清洗器、容量瓶25ml、GM.05型真空泵。 试剂：纯化水、乙腈、二水磷酸二氢钠、磷酸、氯化钠、0.01mol/L盐酸溶液、 甘精胰岛素工作对照品（来源：珠海联邦制药股份有限公司）企业标准，含量（96.5%）、 甘精胰岛素干粉， （珠海联邦制药股份有限公司提供）批号：431210305。 2.检测方法 色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.15mol/L磷酸盐缓冲液-乙腈-水- 氯化钠 （250ml：250ml：400ml：18.4g）：0.15mol/L磷酸盐缓冲液-乙腈-水-氯化钠 (250ml-650m