膜片钳常见问题解答讲解.pdf

膜片钳常见问题解答（一） 1.什么是电压钳与膜片钳，有什么区别？ 答：电压钳技术是通过向细胞内注射一定的电流，抵消离子通道开放时所产生 的离子流，从而将细胞膜电位固定在某一数值。由于注射电流的大小与离子流 的大小相等、方向相反，因此它可以反映离子流的大小和方向。膜片钳技术钳 制的是“膜片”，是指采用尖端经过处理的微电极与细胞膜发生紧密接触，使 尖端下的这片细胞膜在电学上与其它细胞膜分离，这大大降低了背景噪声，使 单通道微弱的电流得以分辨出来。采用电压钳技术将这片膜的电位钳制在某一 数值，可记录到单通道电流。从这点上看，膜片钳技术是特殊的电压钳技术。 随着膜片钳技术的发展，它已经不仅仅局限于“膜片”的概念，也不仅仅采用 电压钳技术，还常采用电流钳技术。 2. 离子通道电导的单位是什么？如何换算？ 答：离子通道电导的单位是西门子（Siemens, S），旧称姆欧，即安培/伏特。 常用皮西门子（pS），1pS＝10E-12 S， 1,000 pS＝1 pA/mV。 3. MultiClamp 700A 中，在放大器和信号器的连接中，放大器的raw output是 否需要连接信号器的 ANALOG IN 接口? scaled output，raw output 有什么区 别? 答：Raw output 为原始信号输出，放大器输出的信号没有经过处理（如滤波、 放大等），scaled output 为定标输出，输出的信号经过了处理。后者的灵活度 大，因此多采用。目前膜片钳放大器多设有scaled output，你可将其与数模转 换器（你所说的信号器）的ANALOG IN 连接，这样放大器的输出信号就能传送 给计算机了，此时已经没有必要再使用Raw output 了。若你想记录两个输出， 则需要将Raw output 与数模转换器的另一个ANALOG IN 连接。 4. 在Clampex 的Edit protocol/Wav 中，Step 和ramp 各有什么适用范围？ 答：Ramp 多用于电流衰减缓慢的离子通道以及失敏不明显的受体通道的 I-V曲 线制作，如多用于钾、钙离子通道。而像钠通道，其衰减非常迅速，在持续去 极化的情况下，通道很快失活，无法使用 ramp，另外诸如烟碱受体通道等具有 明显失敏特征的受体通道也不宜采用 ramp。 5. 什么是ramp？有什么作用？ 答：与步阶（step）不同，ramp 在 pClamp 软件中表示施加给细胞的一种逐渐变 化的电压或电流，称为“斜坡电压或电流”，可用于作通道 I-V曲线。 膜片钳常见问题解答（二） 6. input resistanc 是什么意思？如何测量？ 答：在电生理学中，“input resistance”指“输入膜电阻（Rin）”。全细胞 记录时，给细胞膜施加一系列刺激方波（一般为超极化），在离子通道没有开 放的情况下测定跨膜电流，根据欧姆定律即可求出 Rin。膜电阻（Rm）与膜输入 阻抗 Rin 的关系为：Rm＝4πr2 Rin，r 为细胞半径。 7. 在一次电压钳全细胞记录中，是否每次一定要做电容消除、串连电阻补偿、 漏减、和液接电位矫正？ 答：在电压钳实验中，如果需要给予细胞电刺激来改变细胞膜电位（如超极化 或去极化），则会出现膜的被动反应，产生电容电流与电阻电流，此时，前者 需要用电容补偿消除，后者需要用漏减功能消除。全细胞记录中，串联电阻是 必须要补偿的（至少要补偿 80%），除非它很小而忽略不计。液接电位（一般在 10mV 左右）也需要校正，除非它很小。你可采用 Clampex 软件中的菜单 Tools/ Junction Potential 功能对其测算，然后决定是否需要校正。 8. Decay 是什么意思？和 inactivation有何区别? 答：Decay 是“衰减”之意， inactivation是“失活”之意，但在文献中经常 混用，decay 也常常被说成失活，例如钙电流的衰减常被说成失活，这样用也没 什么问题。但实际上，两者细分的话还是有区别的。可以将 Inactivation 分为 稳态失活与非稳态失活。后者即 Decay，是指在刺激因素（电位变化、施加药物 等）持续存在下通道的失活，而稳态失活（Steady-state inactivation）一般 是指将膜电位钳制在不同的水平，然后观察通道的失活情况，做出失活曲线。 9. 什么是尾电流，他主要反映通道的什么特性及用在那些方面？ 答：在离子通道的激活因素（去极化或超级化）结束时通道的关闭过程叫做去 激活 (Deactivation)，所记录到的电流称为尾电流（Tail current）