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DNA的粗提取与鉴定 dna的粗提取与鉴定（选修） 一、 实验原理 1．dna在nacl溶液中的溶解度，是随着nacl溶液浓度的变化而改变的。当nacl物质的量浓度为0.14mol/l时，dna的溶解度最低。 2.DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的许多其他物质可以溶于酒精溶液。3.如果是二苯胺，DNA将被染成蓝色（如果是甲基绿溶液，则为蓝绿色）。鸟类红细胞有细胞核，DNA和蛋白质在细胞核中结合形成染色质。 二、实验步骤 实验步骤鸡血细胞溶液的制备（由教师完成）1。从鸡血细胞中提取核物质的操作方法实验原理取100ml质量浓度为0.1g/ml的柠檬酸钠溶液，防止血液与新鲜鸡血混合搅拌，然后在冰箱中放置一天使其凝固，让血细胞放置数天，除去上清液，即，分离鸡血细胞溶液和血浆。将20ml蒸馏水与约5-10ml鸡血细胞溶液混合，并沿一个方向快速充分搅拌，然后用单层纱布过滤。取质量浓度为2mol/L的40ml NaCl溶液于烧杯中，与上述滤液混合，轻轻搅拌一个方向，将DNA溶解于细胞核中，分离染色质中的DNA和蛋白质，沿烧杯内壁缓慢加入蒸馏水，轻轻搅拌一个方向，此时白色丝状粘性物质不再增加，停止加水，用多层纱布过滤。取纱布上的粘性物质，使细胞过度吸水而破裂。DNA在高浓度NaCl溶液中的溶解度较大，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的降低而降低，蛋白质的溶解度则相反。2.溶解DNA。3.沉淀含有DNA的粘性物质。4.过滤含有DNA的粘性物质。用镊子将粘性物质夹在纱布上，放入20ml质量浓度。5.将DNA重新溶解在2mol/lnacl溶液中，并朝一个方向搅拌，直到完全溶解。6.重新过滤。7.提取相对纯净的DNA，用两层纱布过滤。取滤液，放入小烧杯中。取95%（按体积计）将冷却的乙醇（约为滤液DNA不溶于乙醇的1.5-2倍）与滤液混合，并沿一个方向缓慢搅拌以沉淀。当出现细丝时，用玻璃棒将其卷起，并取两个试管：1号：0.015mol/lnacl5ml+4ml二苯胺；2号：如果是二苯胺，则将0.015mol/lnacl5ml+长丝+DNA染色成4ml二苯胺。沸水浴5分钟；观察并比较溶液的蓝色变化。8.识别DNA。三、 实验成功的关键及预防措施 1．血细胞加水以后，必须充分搅拌，不应少于5min。否则，血细胞核不会充分破碎，释放出的dna就会减少，过滤时采用单层纱布。 2.向血细胞滤液中加入NaCl溶液时，必须充分摇动烧杯，使其均匀混合，这可以加速核蛋白、游离DNA的解聚，并使DNA完全溶解在NaCl溶液中。 3．析出dna的步骤中必须充分加水，才能稀释nacl溶液，使dna溶解度变小，蛋白质溶解度增大，二者分离。同时应用玻璃棒不停地缓慢搅动，使dna聚集（玻璃棒有吸附dna的作用）。如果在此步骤中，4．在析出的dna充分溶解。 5.向2份冷酒精中加入至少储存在冷酒精浓度和沉淀（低于5℃）中的NaCl溶液。酒精处理后，溶液中悬浮的细丝减少。将混合物放入冰箱冷却几分钟，然后用玻璃棒卷起细丝。 6．在进行步骤3、向，以便获得较完整的手缓慢转动5～10min。7．盛放鸡血细胞液的容器，最好是塑料容器。鸡血细胞破碎以后释放出的易被玻璃容器吸附，由于细胞内提取到的dna就会更少。因此，实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管，这样可以减少提取过程中dna的损失。整个实验共有“三次过滤，两次析出，六次搅拌”：三次过滤：第1、3使用纱布为多层。 六次搅拌：除最后一次搅拌外，其余搅拌步骤应连续轻轻搅拌。使用蒸馏水两次：步骤3是稀释NaCl（另一次沉淀是在步骤中添加NaCl溶液三次：当步骤中的物质浓度为0.015mol/ldna时，可以使用）。两者的体积比被卷起。执行步骤DNA 是为了得到浓度低于血细胞内部浓度的溶液，2、5，目的都是为了溶解再增加过滤，则可得较粘稠的线状物nacl溶液之后，必须充分搅拌，使95％酒精，必须经过充分预冷【在冰箱dna丝状物的方法是缓慢旋转玻璃棒。,而且搅拌要轻缓，并沿同一个方7时，要将玻璃棒插入烧杯中溶液的中间，用 对于1~2层，第二次搅拌是在一个方向上进行的，第一次快速搅拌是在其溶解度的最低点0.14mol/l%乙醇，也称为DNADNA。 1∶2，即将2次要用其滤出的粘稠物，使血细胞胀破；，从而使 ，步骤DNA）。 dna(至份含dna如果用冷dna，容,dna析出8中加入的（含再溶解步骤中，加入浓24h15时，玻璃棒不要直插烧杯底部dna分子 水的含量相对较小，然后被玻璃容器吸附 次要用其滤液，使用纱布为第51溶液使其达到dna7，加入冷却的95的凝集。）中加入的量的浓度为2mol/l实验原理