治疗药物监测HPLC分析方法建立探讨.ppt

室间质评室间质量评价（External Quality Assessment, EQA） 由非本单位的机构，采用一系列办法来客观地评价实验室的结果，其主要目的是建立实验室间的可比性。该计划是多个标本周期性地发送到实验室进行分析和/或鉴定，将每一实验室的结果与同组的其它实验室的结果或靶值进行比较，并将比较的结果报告给参与的实验室。 第三十页，共五十七页。 方法学回顾 用已知证明未知 合理是统计上的合理 第三十一页，共五十七页。 标准曲线是根本 精密度结果是标准曲线的保障 相对回收率是分析方法的效能指标 绝对回收率是重要相关因素 灵敏度、检测限、选择性是性能参数 第三十二页，共五十七页。 治疗药物监测方法的特点 临床要求 快速 样品量少 ，一般１毫升 样品复杂，不确定干扰较多 测定准确度要求高 第三十三页，共五十七页。 治疗药物监测方法的建立的一般过程 第三十四页，共五十七页。 第三十五页，共五十七页。 基本实验技术 5.2.1 样品制备目的是使样品与所使用的HPLC方法相兼容，即把分析样品中的待测组分转化为适合HPLC直接进样分析的试液。对于一些较复杂的样品，样品制备还包括预分离富集、衍生化等预处理步骤。液相色谱法的精密度和准确度往往取决于样品制备的质量。 第三十六页，共五十七页。 一、样品的溶解用于溶解分析样品的溶剂应与液相色谱流动相互溶，最好选用流动相来溶解或提取被分析样品的待测组分，这样可以避免溶剂峰的干扰。制备好的分析试液应为均相溶液，无不溶物，否则在进行色谱分析之前应进行0.45μm或0.2μm微孔膜过滤。 第三十七页，共五十七页。 样品前处理 一过滤和离心 对于基体复杂的样品液，不溶物可以通过过滤或高速离心除去。有时加入合适沉淀剂或改变溶剂，使大分子基质以沉淀方式除去。 第三十八页，共五十七页。 液液萃取 水样中的许多待测有机化合物可以通过液液萃取到有机相后进行液相色谱分析。 第三十九页，共五十七页。 固相萃取 利用选择性吸附与选择性洗脱的液相色谱分离原理，使液体样品通过一吸附剂小柱，保留其中某些组分，再选用适当的溶剂冲洗杂质，然后用少量溶剂迅速洗脱，从而达到快速分离净化与浓缩的目的。 第四十页，共五十七页。 * 治疗药物监测HPLC分析方法建立探讨 王峰 第一页，共五十七页。 HPLC在治疗药物监测中的应用 监测药物种类繁多：茶碱、华法令、氯丙嗪、抗癫痫类药物、镇静催眠类药物、胺碘酮、免疫抑制药物等等。 可监测浓度范围：紫外可见光监测器，荧光检测器（高２－３各数量级），电化学检测器（10-12g），质谱检测器（10－１５g)，但具体与药物本身结构与检测条件有关 主要的缺陷：操作复杂、容易被干扰、 第二页，共五十七页。 建立治疗药物监测方法的准备工作 了解所要监测药物的基本情况：监测范围、理化性质、监测意义 查阅文献 结合实际条件。 第三页，共五十七页。 方法学问题探讨 １、为什么要考察标准曲线？ ２、为什么要考察紧密度？ 3、为什么要考察方法回收率？ ４、为什么要考察绝对回收率？ １、用已知的东西去了解未知东西。 ２、合理的东西是多大概率上的合理 　　　 第四页，共五十七页。 为什么要考察标准曲线—定量分析依据 标准曲线是定量分析的根本依据 １、药物浓度（或质量）与药物在检测器上的产生的信号（通常采用峰面积A）成比例(正比) 即C１／C１＝A１／A２或M１／M２ ＝A１／A２ 图示： 第五页，共五十七页。 通常外标法计算CX： CX／C０＝AX/A０ 结论：所建立的方法充分条件就是测定范围内标准趋向成线性关系 第六页，共五十七页。 标准曲线的几个问题 NCCLS EP6-P，定量分析方法线性的评价：推荐指南（1986）。 本文件包含评价仪器或定量分析方法是否满足制造商线性要求的方法; 以及为厂商提供了检测线性范围声明的指南。 本文件为设计评估临床化学仪器精密性能试验提供了指南；将结果估计的精密度与制造商的精密要求进行比较，以及确定比较是否有效。 第七页，共五十七页。 １、相关系数是评价线性的客观标准，但应考虑到实际测定的需要，合理采用权重系数（１／x,1/x2,1/y,1/y2)（回收率） 第八页，共五十七页。 ２、标准曲线的范围确定取决于样品最低浓度与最高浓度。 第九页，共五十七页。 ３、研究方法线性一般采用6-10点，并非点越多越好，合理是统计学上的合理。 第十页，共五十七页。 ４、影响标准曲线的可能因素 仪器相应因素（仪器响应线性与方法线性的关系） 样品方法因素 色谱条件 第十一页，共五十七页。 第十二页，共五十七页。 ２、为什么要考察精密度－标准曲线的必要保证