刺五加中紫丁香苷的提取分离及抗肿瘤作用研究.pdfVIP

刺五加中紫丁香苷的提取分离及抗肿瘤作用 研究 汪琢，姜守刚，祖元刚，付玉杰，张宇 【摘要】目的研究紫丁香苷的体内外抗肿瘤作用。方式应用 MTT 法观看紫丁香苷对体外培育的 4 种人癌细胞的抑制作用，构建 S180 实体瘤小鼠模型研究紫丁香苷的体内抗肿瘤作用。结果紫丁香苷对体 外培育的 4 种人癌细胞有必然的抑制作用，而且能抑制小鼠 S180 实体 瘤。结论紫丁香苷具有必然的体内外抗肿瘤活性。 【关键词】紫丁香苷; 提取分离; 抗肿瘤作用; MTT; 小鼠 刺五加为五加科植物刺五加 Acanthopanax Senticosus Maxim) Harms 的干燥根及根茎,要紧散布在我国的黑龙江、吉林、河北、山西、 宁夏、陕西及四川等地，朝鲜、俄罗斯远东地域及日本北海道等地亦 有散布和种植[1]。刺五加具有利气健脾、补肾安神之功效, 要紧用于 脾肾阳虚、体虚乏力、食欲不振、腰膝酸痛、失眠多梦等病症[2]。另 外，国内外对刺五加的药理作用研究还说明，刺五加可增强机体非特 异性防御能力，除具有免疫调剂、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射损伤及抗 疲劳等作用外，还可医治心脑血管疾病、糖尿病、神经虚弱等症[3]。 刺五加的根和茎部份含有多种活性化学成份, 到目前为止，分离出的 重要成份为苷类化合物。紫丁香苷为β-谷甾醇葡萄糖苷，是一种较为 典型的苷类化合物[4]，对它的研究要紧集中在含量测定，而药效学研 究并非多见，文献报导其有降血脂[5，6]和增强免疫力作用(张勇.《紫 丁香苷的测定及其降血脂增强免疫力的研究》.2004 吉林大学硕士学 位论文)，对心肌缺血的爱惜(张迪. 《刺五加皂苷单体B 对大鼠急性心 肌缺血的爱惜作用》.2006 东北师范大学硕士学位论文),抗氧化[7]和 抗抑郁[8]等作用。本实验从刺五加根茎中提取分离紫丁香苷，进行了 结构确认，并在此基础上对紫丁香苷进行了抗肿瘤作用研究。 1 仪器与材料 仪器 CO2 培育箱, 美国 SIM 公司;TS-100 倒置显微镜, 日 本 Nikon 公司;DL-CJ-2 生物干净工作台, 哈尔滨市东联电子技术 开发;Stat Fax-3200 酶标仪 ,美国 AWARENESS 公司;1-15K高速冷冻 离心机, 德国 Sigma 公司;BS110 电子天平, 美国 Sartorius 公司; 3102 型电子天平,辽宁龙腾电子 ;DK-8D 型电热恒温热水槽 ,上海森 信实验仪器 ;一次性 针头式滤 器, 美 国 Pall Life Sciences 公 司;Milli-Q 超纯水系统, 美国 Millpore 公司 ;MDF-U32V 超低温冰 箱, 日本SANYO 公司;PB-21 PH 计, 美国 Sartorius 公司;accu-jet 电动移液器 ,德国 Brand 公司;吉尔森 Gilson 移液器 ,法国 Gilson 公司;LDZX-40BI 型立式自动电热压力蒸气灭菌器 , 上海申安医疗器 械厂;X-4数字显示显微熔点测定仪(温度未较正)，北京泰克仪器制造; 旋光用 WZZ-1S 型数字自动旋光仪，上海浦东物理光学仪器厂;液相质 谱仪 API3000 ，加拿大Applied Biosystems 公司; AV-300 核磁共振 波谱仪(TMS 内标，300 MHz)，美国 Bruker 公司;Waters 600 半制备 液相 (Waters2996 二极管阵列)，美国 Waters 公司 ; HYPERSIL C18 ( mm×150 mm 5 μm)色谱柱，美国 Waters 公司;RE-52AA旋转蒸发 仪，上海亚荣生化仪器厂。 药品%的生理盐水,哈尔滨三联药业产品;RPMI1640 培育基, 美国 Hyclone 公司产品;胰蛋白酶 ，美国 Gibco 公司产品;EDTA， 美 国Sigma 公司产品;MTT(噻唑蓝)， 美国 Sigma 公司产品;小牛血清， 天津灏洋生物制品科技有限责任公司产品;96 孔培育板， 加拿大 JET 公司产品;二甲基亚砜(DMSO)， 美国 Amerseco 公司产品;青霉素、链 霉素， 美国 Hyclone 公司产品; 甲醇(色谱级、分析纯)、其他试剂 均为分析纯，青岛海洋化工厂产品;环磷酰胺，江苏恒瑞制药厂产品。 动物昆明种小鼠，雄性 18～22 g,由哈尔滨医科大学肿瘤医 院提供;荷肉瘤 S180 小鼠，由哈