21-生物化学习题与解析--常用分子生物学技术的原理及其应用.docx

21-生物化学习题与解析 --常用 分子生物学技术的原理及其应 用 D 3 ．实时 PCR 技术与普通 PCR 技术相比，它可以动态监测反应过程中产物的 量。 4 ． Sanger 法在测定核酸序列时，反应管中加入的 dNTP 仅标记一种即可。 5 ．生物芯片可以是 DNA 芯片、 cDNA 芯片或蛋白质芯片。 6 ．酵母双杂交技术是分析 DNA— 蛋白质相互作用的一项重要技术。 7 ．核转移技术，是指将动物体细胞核全部导入另一个体去除了胞核的卵细胞 内，使之发育成个体。 8 ．基因矫正是用正常的基因通过体内基因同源重组，替换致病基因来达到治 疗目的。 9 ．目前基因治疗多采用基因增补的方式。 10 ． RNA 印迹技术中， RNA 分子在转移前需进行限制性内切酶切割。 11 ． PCR 反应中变性主要是使模板 DNA 完全变性为单链。 12 ．实时 PCR 技术中， TagDNA 聚合酶在链延伸过程中遇到荧光探针，可发 挥 3 →5 核酸外切酶活性。 13 ．酵母双杂交系统可用于证明两种已知基因序列的蛋白质可以相互作用的生 物信息学推测。 14 ．转基因技术即动物克隆技术，是无性繁殖。 15 ．内源基因结构突变发生在生殖细胞可引起恶性肿瘤。 16 ．基因转移和基因剔除技术在医学中最重要的用途是建立疾病动物模型。 17 ．定位克隆是指从对基因编码产物的功能的了解出发来克隆致病基因。 18 ．目前 DNA 序列分析是找出患者有关基因变异所在的最为直接和确切的基 因诊断法。 三、填空题 1 ．分子杂交是利用 DNA 和 这一基本性质来进行 DNA 或 RNA 定性、定量分 析的。 2 ．在印迹技术中，将 DNA 片段在琼脂糖凝胶中 使其成为 ，利用 使胶中的 生物大分子转移到 膜上，使之成为固相化分子。 3 ．印迹技术的基本流程依次为 、 、 和 。 4 ． Southern blotting 主要用于 定性和定量分析，亦可用于 和 的分析。 5 ． Northern blotting 主要用于检测 的表达水平，敏感性较 PCR ，但其具 有 和 的优点。 6 ． Western blotting 主要用于检测样品中 的存在、细胞中 以及 的相互作 用研究等。 7 ． PCR 的基本反应步骤包括 、 、 。 8 ．基因芯片适用于分析不同组织细胞或同一细胞不同状态下的 ，其原理是基 于 。 9 ．在转基因技术中，被导入的目的基因称为 ，目的基因的受体动物称为 。 10 ．标签融合蛋白结合实验主要用于证明 是否存在直接的物理结合，分析结 合的 及筛选细胞内与融合蛋白相结合的 。 11 ．染色质免疫沉淀法是目前可以研究 与 相互作用的主要方法。 12 ．目前克隆致病相关基因主要有 和 两大策略。 13 ．根据受体细胞的类型不同，基因治疗分为 的基因治疗和 的基因治疗两大 类。 14 ．目前使用的基因载体有 和 两大类。 15 ．在人类基因治疗实施中，导入基因的方式有 和 两大类。 四、名词解释 1 ． probe 2 ． blotting technologe 3 ． gene libary 4 ．核转移技术 5 ． gene chip 6 ． gene therapy 7 ． gene diagnosis 8 ．基因疫苗 9 ． gene inactivation 10 ． gene replacement 11 ． gene augmentation 12 ． PCR 13 ． ex vivo 五、问答题 1 ．简述印迹技术的分类及应用。 2 ．简述 PCR 反应体系的基本成分、 PCR 的基本反应步骤和主要用途。 3 ．简述 PCR 技术的基本原理。 4 ．简述逆转录 PCR 、原位 PCR 和实时 PCR 技术的基本原理和主要区别。 5 ．简述 DNA 链末端合成终止法( Sanger 法)测序的基本原理。 6 ．简述基因转移和基因剔除技术在医学发展中的作用。 7 ．简述酵母双杂交技术的基本原理及应用。 8 ．试述染色质免疫沉淀法基本原理及用途。 9 ．简述基因诊断的概念及特点。 10 ．何为基因治疗，目前基因治疗有哪些基本策略？ 11 ．试述基因治疗的基本程序。 12 ．欲生产一种药用多肽，科学家已经将此多肽的基因与某真核表达质粒重组 在一起。请你设计一个实验，利用 PCR 方法鉴定此重组表达质粒是否含有这一 多肽的基因。 13 ．请设计一个实验，利用酵母双杂交系统检测从某一癌组织中提取、纯化的 一种未知蛋白质 X 与两种已知蛋白质 a 、 b 之间是否有相互作用。 14 ．请为某一单基因遗传病 (低表达或不表达) 的患者设计一个基因治疗方案。 参考答案 一、选择题