整套教学课件《仪器分析-色谱》.ppt

4.3.2、毛细管电泳的进样方式 进样量：毛细管长度的1%-2%；纳升级、非常小； 1. 流体力学进样方式 （1）进样端加压 （2）出口端抽真空 （3）虹吸进样 * 毛细管一端插入样品瓶，加电压； 2. 电动进样方式 进样不均：电歧视现象，淌度大的离子比淌度小的进样量大； 离子丢失：淌度大且与电渗流方向相反的离子可能进不去； 特别适合黏度大的试样； * 4.4、毛细管电泳分离模式 4.4.1、毛细管区带电泳 capillary zone electrophoresis，CZE 带电粒子的迁移速度=电泳和电渗流速度的矢量和。 正离子：两种效应的运动方向一致，在负极最先流出； 中性粒子：无电泳现象，受电渗流影响，在阳离子后流出； 阴离子：两种效应的运动方向相反；ν电渗流 ν电泳时,阴离子在负极最后流出,在这种情况下,不但可以按类分离,同种类离子由于差速迁移被相互分离。 最基本、应用最广的分离模式； * 1. 缓冲溶液中加入离子型表面活性剂，其浓度达到临界浓度，形成一疏水内核、外部带电的胶束。 4.4.2、胶束电动毛细管色谱 micellar electrokinetic chromatography，MEKC 在电场力的作用下，胶束在柱中移动。 加入十二烷基磺酸钠 * 2. 电泳流和电渗流的方向相反，且ν电渗流 ν电泳 ，负电胶束以较慢的速度向负极移动； 5. 色谱与电泳分离模式的结合。 3. 中性分子在胶束相和溶液（水相）间分配，疏水性强的组分与胶束结合的较牢，流出时间长； 4. 可用来分离中性物质，扩展了高效毛细管电泳的应用范围； * 4.4.3、毛细管凝胶电泳 capillary gel electrophoresis，CGE 将聚丙烯酰胺等在毛细管柱内交联生成凝胶。 其具有多孔性，类似分子筛的作用，试样分子按大小分离。能够有效减小组分扩散，所得峰型尖锐，分离效率高。 蛋白质、DNA等的电荷/质量比与分子大小无关，CZE模式很难分离，采用CGE能获得良好分离。 采用芯片阵列技术，为完成人类DNA基因测序，CGE作出了极大的贡献。 * 在毛细管壁上键合或涂渍高效液相色谱的固定液，以电渗流为驱动力，试样组分在两相间的分配为分离机理的电动色谱过程。 4.4.4、毛细管电色谱 capillary electroosmostic chromatography ，CEC 填充柱的基本结构 1 入口柱塞; 2 填充部分; 3 出口柱塞; 4 检测窗口; 5 开管部分 * 4.5、毛细管电泳应用 一、离子分析 二、药物分析 三、手性化合物分析 四、氨基酸分析 五、核酸分析及DNA测序 六、蛋白质分析 * 毛细管区带电泳分离30种阴离子电泳图 * * 第5节 色谱分析样品前处理技术 * 样品分析过程 样品采集 样品前处理 分析测定 数据处理与报告结果 样品前处理成为整个分析过程中的关键环节！ 前言 * 样品中欲测组分的含量很低 原始样品的基体干扰大 样品是粘滞的流体、胶体溶液或者固体 需要进行样品处理 * 样品前处理技术 液体样品 液液萃取 液液微萃取 固相萃取技术 固相微萃取技术 膜萃取技术 固体样品 索式提取 超声波提取 加压溶剂萃取 微波提取技术 超临界流体萃取技术 * 5.1 固相萃取 与液液萃取相比较，固相萃取具有如下优点： （1）有机溶剂消耗量低； （2）采用高效、高选择性的吸附剂，能更有效地将分析物与干扰组分分离； （3）无相分离操作过程，容易收集分析物； （4）能处理小体积试样； （5）操作简便、快速，费用低，易于实现自动化及与其他分析仪器的联用。 * HPLC与SPE比较 * 固相萃取基本操作步骤 ： * 5.1.2 固相萃取装置 固相萃取柱 * 3.4 液相色谱日常操作和维护 流动相：过滤、脱气 色谱柱保存和维护 进样 检测器 * 思 考 题 1．从分离原理、仪器构造及应用范围上简要比较气相色谱及液相色谱的异同点。 2．液相色谱中影响色谱峰展宽的因素有哪些? 与气相色谱相比较, 有哪些主要不同之处? 3．在液相色谱中, 提高柱效的途径有哪些?其中最有效的途径是什么? 4．液相色谱有哪几种类型?分离原理如何？ * 第4节 毛细管电泳 * 4.1、概述 4.2、理论基础 4.3、毛细管电泳仪 4.4、毛细管电泳分离模式 4.5、毛细管电泳应用 * 4.1、概述 在电解质溶液中，位于电场中的带电离子在电场力的作用下，以不同的速