酶组织化学应用PPT课件2.ppt

* * * * * * * * * * * * * * 小鼠心肌冰冻切片-琥珀酸脱氢酶 X400 * 2. 乳酸脱氢酶（LDH） 需辅酶的脱氢酶 广泛分布的可溶性酶，为糖原分解的酶系 最适PH 7.4 肝、骨骼肌的酶活性高于心肌 【基本原理】催化乳酸和丙酮酸的互变反应 乳酸盐 + NAD 丙酮酸盐 + （NADH+H+） LDH （辅酶Ⅰ） （还原型辅酶Ⅰ） * （二）过氧化物酶 催化各种物质被过氧化氢（H2O2）所氧化 见于乳腺、甲状腺、唾液腺、肥大细胞等 髓过氧化物酶见于中性和嗜酸性白细胞及其前体细胞中，对造血系统疾病的鉴别诊断极为重要 免疫组化中常用辣根过氧化物酶（HRP）作为大分子示踪剂 【显示方法】二氨基联苯胺法示过氧化物酶 【基本原理】过氧化物酶作用于底物（3，3-二氨基联苯胺，DAB），催化底物被H2O2氧化，生成棕色的沉淀 【作用液】DAB，Tris-cl缓冲液， H2O2 【结果】酶活性处呈棕色 * 小鼠腹腔巨噬细胞-过氧化物酶 *400 * 白血病涂片-过氧化物酶 X400 * 后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 * 主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等 公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！ * 致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 酶组织化学 ---水解酶及氧化还原酶 组织化学原理及方法 * 组织化学 狭义 应用化学和物理学原理在组织切片上，加入某种试剂使其与组织切片中欲检测的物质发生反应，最终形成有色沉淀，在显微镜下观察，以研究组织细胞结构与功能之间的关系。 * 1. 基本原理 细胞内的酶催化分解合适的底物，生成中间产物（即初级反应产物） 然后其中之一再与辅助物（或捕捉剂）反应，生成有色不溶性的终反应产物 该反应产物沉积在原位，以显示酶的存在 * 显示酶的组织化学方法 1.金属沉淀法：磷酸酶的显示 甘油磷酸钠 磷酸酯+铅 磷酸铅 硫化铅 2.偶氮偶联法：显示各种酶类最重要的方法 酸性磷酸酶 底物 酶 初级反应产物-不易扩散 重氮盐 最终反应产物-呈色 * 偶氮偶联法 ⑴ Gomori萘酚磷酸酯法---AKP在碱性条件下将α-萘基磷酸钠水解出α-萘酚, 随后α-萘酚与固蓝B盐在酶活性部位偶联, 形成紫红至紫黑色的不溶性沉淀 【孵育液】 α-萘基磷酸钠, 蒸馏水, 5%四硼酸钠, 10%硫酸镁, 固蓝B盐 ⑵ 六偶氮对品红与α-萘酚偶联---以萘酚AS-BI磷酸酯或萘酚AS-TR磷酸酯与六偶氮对品红。（偶联人工合成的磷酸萘酚盐经碱性磷酸酶水解后释放出萘酚，后者立即与重氮盐偶联生成不溶性偶氮色素） 【孵育液】萘酚AS-BI磷酸钠, 二甲基甲酰胺(DMF)或二甲基亚砜(DMSO), Tris-cl或巴比妥醋酸缓冲液, 六偶氮对品红 * 【操作步骤】 1.小块组织液氮骤冷, 低温冰箱切片 2. 甲醛钙液(Fca)固定5分钟, 4℃, 然后蒸馏水洗, 也可不固定 3. 作用液5~60分钟, 37℃或室温 4. 蒸馏水洗 5. 4%甲醛固定15分钟~2小时, 室温 6. 自来水洗, 蒸馏水洗 7. 1%甲基绿(氯仿洗过)5~10分钟, 蒸馏水洗 8. 甘油明胶封片, 或丙酮-丙酮甲苯-DPX封固 【结果】酶活性处出现红色无定形的沉淀, 核呈蓝绿色 * 酶的种类 1. 氧化还原酶 2. 转移酶 3. 水解酶 4. 裂合酶 5. 异构酶 6. 合成酶 * 水解酶--- 一类增加或去除水，催化水解反应的酶 AB+H2O AH+BOH * （一）碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，AKP） 又称碱性磷酸单酯酶（EC3.1.3.1） 在碱性环境下催化多种醇和酚的磷酸酯水解 最适PH 9.2~9.4 激活剂: 如Mg++, Mn++, 某些氨基酸等 抑制剂: 氰化物、砷酸盐等 分布：广泛存在于机体组织，常见于具有活跃转运功 能的细胞膜内，如毛细血管及毛细血管动脉部分的内皮细胞，肾近