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* (一) 触片制备 从肉样中切取3×3×6cm大小的肉块浸入酒精中并立即取出点燃灼烧,如此处理2—3次,从表层下0.1cm处及深层各剪取0.5cm3大小的肉块,分别进行触片或抹片。 * (二) 染色镜检 将干燥的触片用甲醇固定1min,进行革兰氏染色后油镜观察5个视野,同时分别计出每个视野的球菌和杆菌数,然后求出一个视野中细菌的平均数。 * (三)结果评价 新鲜肉:1万/g以下,触片印迹着色不良,表层触片可见到少数的球菌和杆菌,深层触片无菌或偶见个别细菌,触片上看不到分解的肉组织 * 次鲜肉:1万—100万/g,触片印迹着色较好,表层触片上平均每个视野可见到20—30个球菌和少数杆菌,深层触片也可见到20个左右的细菌,触片上明显可见到分解的肉组织。 变质肉:100万/g以上 ,触片印迹着色极浓,表层及深层触片上每个视野均可见到30个以上的细菌,且大都为杆菌,触片上有大量分解的肉组织。 * (一)半微量凯氏定氮法原理 动物性食品由于酶和细菌的作用,在腐败过程中,使蛋白质分解而产生氨( NH3 )以及胺类 (R- NH2)等碱性含氮物质。上述物质可以和组织内的酸性物质结合,形成盐基态氮( NH4+ -R-)此类物质具有挥发性,在碱性溶液中蒸馏出后,用硼酸吸收液吸收,再用标准酸滴定,计算含量。 目前,我国在鉴定肉新鲜度的化学指标中,只将挥发性碱性总氮(total volatile basic nitrogen 简称TVBN)一项列入国家食品卫生标准。 * 测定过程中的反应原理 蒸馏: 2NH4+ + Mg(OH)2 → 2NH4OH + Mg2+ NH4OH △ NH3↑ + H2O 吸收: 2 NH3 + 4H3BO3 → (NH4)2B4O7+ 5H2O 滴定: (NH4)2B4O7+2HCl+5H2O →2 NH4Cl+ 4H3BO3 * (二)、试剂 1、10g/L 氧化镁混悬液 2、20g/L 硼酸吸收液 3、0.0100mol/L 盐酸或硫酸标准溶液 4、2g/L 甲基红—乙醇指示剂 5、1g/L 次甲基蓝指示剂 6、混合指示剂:临用时将上述两种指示液等 量混合。 (三)实验操作 1、样品处理:将样品除去脂肪、骨及腱后,切碎搅匀,称取10.00g,置于锥形瓶中,加100mL水,不时振摇,浸渍30min后过滤,滤液待测。 2、蒸馏和滴定 :(蒸馏装置如下) * 半微量定氮仪器 * 2、微量滴定管:最小分度0.01mL 微量滴定管 * 滴定过程 硼酸 + 指示剂(桃红或蓝紫色) 混合液(吸氨呈蓝色) HCl 中和 混合液(桃红或蓝紫色) * (四)影响挥发性盐基氮测定值的因素 蒸气通入量的大小 反应的强弱 蒸馏时间的长短 滴定终点的判断 * (五)计算 (V1—V0)×c×14 X= ────────── ×100 m×5/100 式中:X—样品中挥发性盐基氮的含量,mg/100g; V1—测定用样液消耗盐酸或硫酸标准溶液体 积,mL; V0—试剂空白消耗盐酸或硫酸标准溶液体积,mL; c—盐酸或硫酸标准溶液的实际浓度,mol/L; 14—与1.00mL 0.1000mol/L盐酸或硫酸标准溶液相当的氮的质量,mg; m—样品质量,g。 * (六) 结果评价 品种 指标 牛、羊、 兔肉 鲜(冻) 禽肉 猪肉(辐照猪肉) 海水 贝类 海水鱼 淡水鱼 河虾 挥发性盐基氮(mg/100g) ≤ 20 ≤ 20 20 ≤15 ≤30 ≤20 ≤ 20 * 二、 鲜肉pH值测定 (一)原理:肌肉pH值的变化反应了肉品质量的变化。 屠宰后的畜肉,由于肌糖元的无氧酵解和ATP的分解,乳酸和磷酸含量增加,pH下降。 * 动物宰后肌肉pH值的变化 * (二)试剂 pH6.86标准缓冲液:取在120℃下干燥2h的磷酸二氢钾(KH2PO4)1.70克,磷酸氢二钠(Na2HPO4)1.775克,以重蒸馏水于500mL容量瓶中定容,在25℃时,pH为6.86 * (三)仪
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