细胞生物学注意这个老师没有课一定要听啊实验.pptx

细胞生物学考试复习提纲 下一页是复习提纲，几乎涵盖了所有我的出题内容，当然题目表述方式可能不太一样。 请注意我留给你们的作业，认真看一下，应该会有类似的活题。 还留了几页ppt给你们，都是试题中可能涉及的内容，当然还有一些内容没留，你们花个几分钟就能通过各种途径找到答案 常用的细胞生物学显微镜的分类。 什么是显微镜分辨率，公式是什么？哪些因素决定显微镜分辨率。 每种类型显微镜的光源，光路。 什么叫荧光？免疫荧光实验原理及流程。 荧光显微镜，激光共聚焦显微镜的光路，特点及异同。 扫描电子显微镜和透射电子显微镜的不同。 什么叫模式生物？有哪些模式生物？它们的特点是什么？ 细胞核染料有哪些？细胞质染料有哪些？ 扫描电子显微镜的成像原理？什么是二次电子？ 简述透射电子显微镜的样品制备步骤 什么是物镜？物镜的组成及分类 光源：能发射光波的物体。 真空中对应的波长范围：390nm – 760nm 相应光色：紫、蓝、青、绿、黄、橙、红 可见光的波长范围： 红620nm--760nm  橙592nm--620nm  黄578nm-- 592nm  绿500nm-- 578nm 青464nm--500nm  蓝446nm --464nm 紫400nm--446nm  光源、聚光器 载物台、样品 物镜 目镜 显微镜的一些基本概念 5 原理： 荧光——物质中的电子吸收特定波长光的能量，使其由低能状态转变为高能状态，再回到低能状态时释放出的光。 用途： 1、利用生物本身的自发荧光观察细胞或细胞器——荧光素 2、利用带有荧光标记的抗体观察及追踪蛋白质时空定位情况 3、定量分析 荧光显微镜观察 载物台 入射光 、激发光、吸收光、Excitation light 荧光、发射光 、 发射光、 Emission light 荧光显微镜和普通显微镜的光路比较与分析 光源、聚光器 载物台、样品 物镜 目镜 普通显微镜 荧光显微镜 荧光显微镜染色的途径 一：直接染色法：利用化学染色剂，对要观察的物质或细胞器进行染色，并进行荧光观察 (Dapi，PI, aniline blue等)。 Dapi: 可以染DNA，起到标记细胞核的作用。Ex:358nm Em:461nm PI: 可以染DNA和RNA。 Ex:535nm Em:615nm aniline blue（苯胺蓝）:可以染B-1,3葡聚糖，可以标记植物的筛管、小孢子母细胞、四分体和花粉管。 Ex:395nm Em:495nm 二，融合蛋白法 利用可以发出荧光的蛋白质与目的蛋白融合，来追踪目的蛋白的“行踪” 目前较为常用的荧光蛋白质有 GFP (Green Fluorescence Protein) mCherry, DsRed YFP 要研究的蛋白质 荧光蛋白质 免疫组织化学和免疫荧光实验 要研究的蛋白质 标记蛋白质 荧光一抗 要研究的蛋白质 标记蛋白质 荧光二抗 激光共聚焦显微镜的光路解析 光源、聚光器 载物台、样品 物镜 目镜 电子显微镜系统 扫描电子显微镜系统 透射电子显微镜系统 电镜不同于光镜的特点： 光源 成像透镜 电镜 电子束 电磁透镜 光镜 可见光 玻璃透镜 加述电压 电子波长 (A)  ( KV ) (经相对论校正) 1 0.388 2 0.224 5 0.173 10 0.122 20 0.0859 30 0.0698 40 0.0601 80 0.0418 100 0.0370 500 0.0142 1000 0.00687 电子的波长 D=0.61λ/ nsin  磁透镜的光学性质 磁透镜的聚焦原理 磁透镜的缺陷——像差 电磁透镜的景深和焦长 扫描电子显微镜的简称为扫描电镜，英文缩写为SEM (Scanning Electron Microscope)。它是用细聚焦的电子束轰击样品表面，通过电子与样品相互作用产生的二次电子、背散射电子等对样品表面或断口形貌进行观察和分析。现在SEM都与能谱（EDS）组合，可以进行成分分析。所以，SEM也是显微结构分析的主要仪器，已广泛用于材料、冶金、矿物、生物学等领域。 　　一束细聚焦的电子束轰击试样