第9章酶促反应动力学finished.pptx

第九章 酶促反应动力学;一、底物浓度对酶反应速度的影响 ;反应出现平衡的原因;米氏方程的提出;;;Km — 米氏常数 Vmax — 最大反应速度;例1、某酶的Km为2.4×10-4mol/L，在底物浓度为0.05mol/L时，该酶的反应速度为128μm/min，求在底物浓度为6.3×10-3mol/L、?1×10-4mol/L时，该酶的反应速度分别是多少？从计算结果可得出什么规律？ 解析：先求Vmax:因为v=Vmax[S]/(Km+[S])，则Vmax=v?(Km+[S])/?[S]=(128×10-3（mmol/min）×0.05)/?0.05=0.128mmol/min 当[S]=?6.3×10-3mol/L时，v=Vmax[S]/(Km+[S])=?（0.128×6.3×10-3）/6.3×10-3=0.128mmol/min 当[S]=?1×10-4mol/L时，v=Vmax[S]/(Km+[S])=?（0.128×1×10-4）/（2.4×10-4+1×10-4）=0.038mmol/min 规律：当[S]Km时，v=Vmax。 ;动力学常数的意义;;Km的意义 – Two Meanings;Km的意义 – Two Meanings;米氏方程的意义;Km在实际应用中的作用;乙醛脱氢酶 - Acetaldehyde dehydrogenase ;ALDH2 – A lower Km (与ALDH1相比） 存在于肝细胞的线粒体基质;Vmax和Kcat的意义;kcat /Km的意义;Chymotrypsin （胰凝乳蛋白酶 ）;具有催化完美性的酶;5．米氏常数的求法 ;;;;（5）直接线性作图法 （Eisenthal和Cornish-Bowden法） ;多底物酶促反应;;1．序列有序反应（ordered reactions 写作  ordered Bi Bi） ;2．序列随机反应（random reactions,写作  Random Bi Bi） ;3．乒乓反应（ping pong reactions，写作Ping Pong Bi Bi） ;二、酶浓度对酶反应速度的影响 ;2．V与[E] 关系的几点讨论 ;三、pH对酶反应速度的影响;酶的最适pH不是一个固定的常数，它受到底物的种类、浓度; 缓冲液的种类、浓度; 酶的纯度;反应的温度、时间等的影响。;2．pH影响反应速度的原因 ;四、温度对酶反应速度的影响 ;最适温度与最适pH一样，也不是一个固定的常数，它随底物的种类、浓度, 溶液的离子强度, pH, 反应时间等的影响。;五、激活剂对酶反应的影响;六、抑制剂对酶反应的影响;(1) 可逆抑制作用：;I 竞争性抑制：;Ribonuclease （RNase）Inhibitor;例: 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制作用 ;竞争性抑制作用的速度方程：;竞争性抑制作用的Lineweaver–Burk图 ：;II 非竞争性抑制：;非竞争性抑制作用的速度方程：;非竞争性抑制作用的Lineweaver–Burk图 ：;L-阿拉伯糖??蔗糖消化酶的属非竞争性抑制 ;III 反竞争性抑制：; 反竞争性抑制作用的速度方程：;反竞争性抑制作用的Lineweaver–Burk图 ：;反竞争性抑制剂的例子：;;(2)不可逆抑制作用：;例: DFP（DIFP）对胰凝乳蛋白酶的抑制 ;酶活性的调节;CCR5 Saturation Assay with 3H-INCB9471 and Different Concentration of Cold Compounds