侵袭性真菌感染的实验诊断-2011.ppt

侵袭性真菌感染的实验室诊断;女，58岁，T2DM 16年。 旅游后38.1℃，轻咳，CT右肺尖0.4cm结节，生化、肿瘤标志物均正常。 住院后CT右肺尖0.8cm、0.4cm两个结节。正电子发射计算机断层显像(PET/CT)右上肺高度代谢灶，右肺门高代谢淋巴结。 抗TB治疗1月，CT示右上肺两结节融合成1.8cm×2.4cm大病灶；PET/CT右上肺、右肺门高代谢灶，恶性病变可能性大。 开胸探查，切除病灶，病理，右上肺隐球菌肺炎，多核巨细胞内隐球菌3+。 口服氟康唑。; DFI（deep fungal infection）;DFI中急、危、重者。真菌在组织器官或血液中生长繁殖，导致炎症反应和组织器官损伤，常伴多器官功能障碍。;2007年欧洲癌症治疗研究组织(EORTC)侵袭性真菌感染协作组(IFICG)和美国国立变态反应与传染病研究所霉菌病研究组(NIAID-MSG)将IFI改称IFD。国内未获响应，现仅用于侵袭性念珠菌病(invasive candidosis,IC)和曲霉病(invasive aspergillosis,IA)。;真菌感染的实验诊断方法及问题;侵袭性真菌病的致病菌;念珠菌病 隐球菌病 侵袭性曲霉病; ICU患者发病率占医院获得性感染8%~15%； 器官移植受者发病率为20%~40%； 艾滋病患者IFI发病率可达90%； 美国念珠菌血症占院内血源性感染的第4位（1995~2002，49家医院）； 1995年115家医院统计IFI发生率为85年1.9倍，2004年为90年代的2.4倍。 CDC统计IFI发病率（例/百万人·年）为178.3（IC72.8，隐球菌病65.5，IA22.4,球孢子菌病15.3，组织胞浆菌病7.1）。 我国医院感染监控网：1998~1999真菌感染占医院感染17.1%。; IC 10%~49%； IA 62%~85%； 骨髓移植者IA病死率70%~90%； 接合菌致IFI病死率70%~100%。 美国Lin统计1995~2001文献1941例IA，死亡率58%（骨髓移植者86.7%，中枢N系统感染或播散性IA88.1%）。;EORTC和NIAID/MSG 2007年修订标准,国内各学会诊治指南。IFI诊断分级： 拟诊（possible） 临床诊断（probable） 确诊（proven）; IFI分级诊断标准;（1）免疫功能低下：艾滋病，重度免疫缺陷，造血干细胞、器官移植长期应用免疫抑制剂，长期应用糖皮质激素。 （2）嗜中性粒细胞＜0.5×109/L（＜500/μl）持续10d以上。 （3）各种ICU重危患者，恶性肿瘤，尿毒症，糖尿病，慢性阻塞性肺病，大面积烧伤，慢性消耗性疾病。 （4）长期应用广谱抗生素，放疗/化疗。 （5）侵入性操作：气管插管，留置导管，腹膜透析，脑室引流，心血管手术操作。;（1）重要脏器罹患时的症状与体征 （2）相应的血、尿常规改变，生化检查指标异常 （3）各种基础病（血液病、艾滋病…..）的临床与实验室检查表现 （4）持续发热96h，经积极的抗菌治疗无效 （5）影像学检查（X线、CT等）： ?肺IA: 胸膜下密度增高结节样实变——病灶周出现晕轮征——实变区液化，空洞或新月征； ?肺孢子菌肺炎: 两肺毛玻璃样间质病变； ?鼻脑毛霉病: 鼻窦、眼眶颅骨骨组织破坏。;（1）合格标本直接镜检发现菌丝且连续2次培养同种真菌阳性。 （2）BALF镜检发现菌丝，培养真菌阳性。 （3）合格标本或BALF镜检或培养发现新生隐球菌。 （4）G试验连续2次阳性。 （5）GM试验连续2次阳性。 （6）血液、胸水、BALF用LA法检测隐球菌荚膜多糖抗原阳性。;（1）血液真菌培养阳性，但曲霉、青霉（马尔尼菲青霉除外）需排除污染。 （2）导管相关性真菌血症，导管培养与血培养均阳性，且为同一真菌。 （3）胸水真菌培养阳性。 （4）肺组织真菌培养阳性。 （5）合格痰标本或BALF镜检发现肺孢子菌包囊、滋养体或囊内小体。 （6）胸水、CSF、血液直接镜检发现新生隐球菌。 （7）直接导尿培养念珠菌105CFU/ml。; 以下列念珠菌属最常见: 白色—（C.albicans） 光滑—（C.glabrata） 热带—（C.tropicalis） 近平滑—（C.parapsilosis） 克柔—（C.krusei） 都柏林—（C.dubliniensis） 季也蒙—（C.guilliermondii）。 ;（1）革兰染色、乳酸酚棉蓝染色，镜检4~6μm圆或卵圆芽胞，可见出芽，假菌丝。 ?用含荧光增白剂（Calcofluor White ，CFW）的10%~20% KOH涂片，紫外线激发呈蓝白或绿色荧光。