组织培养课程感想.docx

植物组织培养（Plant tissue culture）广义上是指无菌条件下，在特定的培养基上对离体的植物器官、组织、细胞和原生质体甚至包括完整植株进行培养的技术。 外植体： 愈伤组织： 一、植物组织的主要特征： 在培养容器中进行； 无菌培养环境，排除了微生物如真菌、细菌以及害虫等的侵入； 各种环境因子如营养因子、激素因子以及光照、温度等物理因子处于人工控制之下， 并可达到最适条件。 通常打破了正常的植物发育过程和格局； 随着单细胞和原生质体培养技术的发展，对植物显微结构进行操作成为可能。二、植物组织培养类型：根据不同分类的依据可以分为不同类型。 1、根据培养材料不同分为： 完整植株培养（Plant Culture）：对幼苗和较大植株等的培养。 胚胎培养（Embryo Culture）：包括成熟胚、幼胚、子房、胚珠等的培养。 器官培养（Organ Culture）：包括离体根、茎、叶、果实、种子、花器官的培养。 组织培养（Tissue Culture）：如分生组织、薄壁组织、输导组织培养。 细胞培养（Cell Culture）：指对单细胞或较小的细胞团进行培养。 原生质体培养（Protoplast Culture）：指对去掉细胞壁后所获得的原生质体进行培养。 三．植物组培的应用 植物离体快繁。 无病毒苗木培养。 培育新品种或创制新物种。 次生代谢物生产。 植物种质资源的离体保存。 人工种子。 1.）实验室包括：准备室，无菌操作室，培养室，温室。 2.）器具的灭菌： 1、器具灭菌：培养皿、解剖刀、镊子等用品。 干热灭菌：铝箔包好后，放于恒温干燥箱内，150 ℃保温 2 小时，成本较高。 高压蒸汽灭菌：高压蒸汽灭菌锅内120 ℃ 15－20 分钟 。 灼烧灭菌：接种时，解剖刀及镊子等浸入95％乙醇，然后取出在酒精灯火焰上灼烧杀菌。 2、培养基灭菌：采用高压蒸汽灭菌。120℃ 15－20 分钟。培养基体积越大，灭菌时间越长。 3、不耐高温化合物：采用过滤灭菌，如IAA 等。 4、外植体的表面灭菌： 采用 70－75％乙醇（10-30 秒）、有效氯1％的次氯酸钠（5-30 分钟）、0.1－0.2% 的氯化汞（2-15 分钟）等。杀菌剂中加入几滴吐温－20 或 80（Tween－20 或 80）效果较好。3）无菌操作： 1、保持接种室的无污染环境，定期熏蒸或喷雾处理，进行消毒。接种前打开超净工作台及紫外灯照射 20-30 分钟，关闭紫外等灯后使气体散出后开始操作。 2、保持超净工作台的洁净：接种前用70％乙醇擦拭台面或用喷壶喷雾，操作前，将手和手臂用70％乙 醇消毒，所需试验用品用乙醇擦拭后放入超净工作台。 3、点燃酒精灯，进行操作，接种材料前后，灼烧瓶口，工具要灼烧彻底，防止交叉污染。 4、保持培养室的洁净，发现污染及时挑出，并在灭菌后清洗，以减少污染源。 5、操作中穿工作服、戴口罩、工作帽，出入接种室换拖鞋以保持接种室的洁净。 4）通常植物组织培养所用培养基包括以下六大类成分， 即矿质营养、可以把植物必需元素分为大量元素和微量元素。国际植物生理学会建议将植物所需浓度大于 0.5 mmol/l 的的元素称为大量元素。低于 0.5 mmol/l 的元素称为微量元素。根据此规则大量元素种类包括 C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S，微量元素包括Fe、B、Mn、Zn、Mo、Cu、Co、Cl 等 有机成分、主要包括各种维生素和氨基酸，如硫胺素（VB1）、烟酸（VB3）、吡哆醇（VB6）、泛酸钙（VB5）、生物素、钴胺素（VB12）、叶酸等以及甘氨酸、谷氨酸、谷氨酰氨、精氨酸、天冬氨酸、天冬酰氨、丙氨酸等。有时添加水解乳蛋白或水解酪蛋白，为牛乳经酶法加工的水解产物，含有 20 种氨基酸的混合物， 用量 10－1000mg/L, 通常用于原生质体等培养。此外肌醇是另外一种重要的有机成分，又叫环己六醇，在糖类的转化中起重要作用，此外还参与磷脂代谢及维持离子平衡等生理作用。 植物生长调节剂、常用的植物激素及生长调节物涉及五大类植物激素： 1、生长素类：IAA、IBA、NAA、2，4-D 2、细胞分裂类：6-BA、KT（Kin）、ZT、2ip 3、赤霉素类：GA3、GA4、GA7 4、脱落酸：ABA 5、乙烯：ETH 碳源、 碳源主要为细胞提供合成新化合物的骨架，为细胞的呼吸代谢提供底物与能源，此外还能维持一定的渗透压。常用的碳源主要是蔗糖，使用浓度在2－5％，此外果糖、葡萄糖、麦芽糖、山梨糖、甘露糖 及可溶性淀粉等也常用于植物组织培养。糖浓度高低直接影响形态建成。 琼脂以及其他附加物等。琼脂作为固化剂用于组织培养中，起支持植物的作用，不提供营养，为海藻中提取的一种高分子化合物，仅溶于热水（90 oC 以上），成为凝胶，冷却后（40 oC 以下）即