细胞生物学实验4凝集.pptx

一、实验目的 1、学习研究细胞凝集反应的方法 2、了解细胞发生凝集反应的原因 ;二、实验原理 凝集素 :一类可逆结合特异糖基的蛋白质，与糖的运输、储存物质的积累、细胞间的互作以及细胞分裂的调控有关。 细胞凝集：凝集素与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”，加入与凝集素互补的糖分子可以抑制细胞间的凝集反应 ;性质： 为糖蛋白(少数例外) 凝集反应所必需的金属离子：Ca2+和Mg2+ 所含糖种类在动物、植物和微生物中不同;特异性： 一种凝集素具有对某一种特异性糖基专一性结合的能力，如： 刀豆素与α—D—吡喃糖基甘露糖结合; 麦芽素与N—乙酰糖胺结合; 菜豆凝集素与N—乙酰乳糖胺结合;功能： 参与细胞的识别和粘着 在植物生长的各个阶段，凝集素以不同的方式保护植物免受害虫的侵害 作为氮源：凝集素在储藏器官和繁殖器官中的含量尤其丰富;凝集素的应用：;三、实验材料与用品 实验材料：马铃薯块茎，韭菜叶片 试剂： (1)磷酸缓冲液：pH 7.2 (2)生理盐水：0.9％氯化钠无菌水溶液 (3)硫酸铵 (4)石英砂;仪器与器材：; 四、实验方法 （1）2% 鸡红细胞悬液制备????? 以无菌方法抽取鸡翅下静脉血液（5mL注射器用1%肝素溶液浸润）1mL，用4mL生理盐水洗3次，每次1500 r/min，离心5 min，最后按沉淀压积的红细胞体积用生理盐水配成2％红细胞悬液 。;? （2）称取土豆去皮块茎4g，切成小块， 5 mL PBS ↓ 加石英砂，研磨，浸泡1.0h ↓ 载玻片上滴一滴浸泡液  ↓ 再滴一滴2％红细胞液，充分混匀  ↓静置10 min  ↓ 显微镜下观察血细胞凝集现象 以PBS加2％血细胞悬液作为对照实验，显微镜下观察 ;? （3） 称取韭菜叶片5g，切成小片 5 mL 生理盐水  ↓ 研磨，过滤， 离心（5000r/min）20 min，留上清液 ↓ 上清液加相应硫酸铵至60%饱和度（边加入边用玻璃棒搅拌至完全溶解），离心（5000r/min）20 min，沉淀用1ml磷酸缓冲液溶解  ↓ 载玻片上滴一滴韭菜凝集素  ↓ 再滴一滴2％红细胞液，充分混匀  ↓静置10 min  ↓ 显微镜下观察血球凝集现象 ;不同饱和度硫酸胺沉淀蛋白质表;五、实验报告及作业;（1）凝集素能与细胞表面的特异性的糖分子连接，介导细胞间黏着； （2）凝集素与细胞的种类、含量、活性； （3）凝集反应的温度、时间、pH等； （4）因为凝集反应需要凝集素和细胞表面的与凝集素特异结合的物质都保持活性。 ;;