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冰冻切片ROS实验报告
1. 实验器材及试剂
1.1 实验器材
名称 厂家 型号
冰冻切片机 Thermo Cryotome E
载玻片 Wanwu
盖玻片 江苏世泰实验器材有限公司
脱色摇床 Wanwu 物 TSY-B
涡旋混合器 Wanwu MX-F
掌上离心机 Wanwu D1008E
万
移液枪 Dragon KE0003087/KA0056573
组化笔 Wanwu WG1066-1
肥
冰箱 青岛海尔股份有限公司 BCD-192TGN
正置荧光显微镜 日本尼康 NIKON ECLIPSE C1
合
成像系统 日本尼康 NIKON DS-U3
1.2 主要实验试剂 物
试剂 厂家 货号 稀释比
万
OCT包埋剂 Wanwu G6059-110ML
PBS缓冲液 Wanwu G0002
ROS染液 SIGMA D7008 1:500
肥
DAPI Wanwu G1012
自发荧光淬灭剂 Wanwu G1221
抗荧光淬灭封片剂 Wanwu 合G1401
2. 冰冻切片免疫荧光实验步骤
2.1 画圈，淬灭组织自发荧光：冰冻切片在室温下复温，控干水分。用组化笔在组织周围画
圈 （防止抗体流走），在圈内加入自发荧光淬灭剂5min，流水冲洗 10min。
2.2 染色：在圈内滴加ROS染液， 避光恒温箱37°孵育30min。
网址：
细胞网址：
地址：合肥市蜀山区长江西路248号11层
电话： 400-1016-218
邮箱：2028438226@
2.3 DAPI复染细胞核：玻片置于PBS （PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
切片稍甩干后在圈内滴加DAPI染液，避光室温孵育10min。
2.4 封片：玻片置于PBS （PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干
后用抗荧光淬灭封片剂封片。
2.5 镜检拍照：切片于荧光显微镜下观察并采集图
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