山茱萸提取部位对D半乳糖致衰模型小鼠骨髓细胞脱氧核糖核酸的影响.doc

山茱萸提取部位对D半乳糖致衰模型小鼠骨髓细胞脱氧核糖核酸的影响 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：山茱萸提取部位对D半乳糖致衰模型小鼠骨髓细胞脱氧核糖核酸的影响 1 1 材料与仪器 2 3结果与讨论 5 文2：山茱萸生品及制品二氯甲烷萃取部位对D半乳糖致衰小鼠骨髓细胞的影响 7 1 实验材料 8 2 实验方法 8 3 结果 11 4 讨论 11 参考文摘引言： 14 原创性声明（模板） 15 文章致谢（模板） 15 正文 山茱萸提取部位对D半乳糖致衰模型小鼠骨髓细胞脱氧核糖核酸的影响 文1：山茱萸提取部位对D半乳糖致衰模型小鼠骨髓细胞脱氧核糖核酸的影响 Abstract：ObjectiveTo investigate the effect of extracts from Fructus Corni on DNA of marrow cells in D-galactose induced subacute aging mice.　MethodsThe subacute aging model was established by D-galactose induced in ICR mice， and the DNA change was tested by single-cell electrophoresis and flow cytometry had the effect on DNA of marrow cells of ICR mice and extracts from Fructus Corni， especially the extract of petroleum showed certain protective effects agait DNA extracts from Fructus Corni have effect on DNA of marrow cells in D-galactose-induced subacute aging mice。 Key words：Fructus Corni; Extract; D-galactose; DNA 山茱萸为山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalis Zucc 的干燥成熟果肉，其味酸、涩，微温，归肝、肾经。临床上多用山萸肉、酒山萸肉。山萸肉长于敛汗固脱，用于自汗或大汗不止，阴虚盗汗;经酒蒸制后，补益肝肾作用增强，多入滋补方剂，临床用于内热消渴，眩晕耳鸣，腰膝酸痛，阳痿遗精，尿遗尿频，崩漏带下，大汗虚脱等[1，2]。现代研究表明山茱萸具有多种药理作用[3]。课题组前期研究表明，山茱萸制品几种提取部位对自然衰老小鼠大脑、卵巢有一定的影响，对骨髓细胞DNA等也表现出一定的保护作用[4~6]。本研究依据前期实验，选择最佳剂量，复制小鼠D-半乳糖化学致衰模型，通过单细胞电泳和流式细胞仪检测，对骨髓细胞DNA进一步观察。实验如下。 1 材料与仪器 药物山茱萸药材，购于河南西峡县山茱萸医药公司，经南京中医药大学陈建伟教授鉴定为山茱萸的干燥成熟果肉。 动物ICR小鼠，体质量18～22 g，由南京中医药大学实验动物中心提供。 试剂正常熔点琼脂糖(NMPA)，华美生物工程公司产品;低熔点琼脂糖(LMPA)，Sigma公司产品，进口分装; TritonX-100，Amresco公司产品，进口分装;溴化乙锭(EB)，Sigma公司产品，进口分装;PI染料，PE公司提供。 仪器BX50/BX-FLA型荧光显微镜，日本OLYMPUS公司出品;DYCP-38A水平电泳槽，北京六一仪器厂产品;DYY-6B型稳压稳流电泳仪 ，北京六一仪器厂产品;流式细胞仪，FACSCalibur，美国产品。 2方法 山茱萸制品几种提取部位的制备山茱萸饮片由南京中药饮片厂按2005版《中国药典》[1]加工制得山茱萸酒蒸品。取一定量的山茱萸酒蒸品，用10倍量95%乙醇回流提取 h，趁热抽滤，药渣加10倍量50%乙醇回流提取 h，趁热抽滤，药渣加10倍量蒸馏水回流提取 h，趁热抽滤，合并滤液，60℃旋转蒸发浓缩制成浸膏，依次用石油醚、二氯甲烷、醋酸乙酯、正丁醇萃取，挥干溶剂即得相应的溶剂萃取物，其中石油醚、正丁醇溶剂萃取部位用吐温-80∶植物油∶水=1∶1∶8配成乳剂在本实验中备用。取一定量的山茱萸酒蒸品粗粉(20目，去核)，加蒸馏水提取 h，抽滤，滤液加无水乙醇至醇浓度为80%(V∕V)，醇沉，过夜，抽滤，然后收集醇沉粗多糖部位，于50℃真空干燥至恒重，精密称定多糖的重量，用蒸馏水配成一定浓度的溶液备用。 亚急性衰老模型的制备取ICR纯种小鼠，每天颈背部皮下注