狂犬病病毒分子生物学基础演示文稿.pptVIP

RV感染的一般步骤 第三十一页，共四十五页。 第三十一页，共四十五页。 RV的复制和转录 第三十二页，共四十五页。 第三十二页，共四十五页。 RV基因转录vs复制 两种状态的RNA聚合酶：RNA转录酶和RNA复制酶。 RNA转录酶：L、P、EF-1αβγ、Hsp60、GT（鸟苷转移酶），从N基因处直接开始转录。 RNA复制酶：L、P、可溶性的N蛋白（N-P复合物形式存在，为复制必须），从基因组的第一个bp处开始合成leader RNA和复制基因组。 第三十三页，共四十五页。 第三十三页，共四十五页。 RV基因的转录 转录重要的顺式作用元件：启动子、转录起始位点和转录终止信号。 RV基因转录调控模式：stop-start model。 第三十四页，共四十五页。 第三十四页，共四十五页。 狂犬病病毒分子生物学基础演示文稿 第一页，共四十五页。 第一页，共四十五页。 （优选）狂犬病病毒分子生物学基础 第二页，共四十五页。 第二页，共四十五页。 病原 狂犬病病毒：Rabies virus, RV。 有两种主要抗原：一种是外膜上的糖蛋白抗原，为主要抗原，决定病毒的嗜神经性、致病性和产生中和抗体；内层的核蛋白抗原，可使体内产生补体结合抗体和沉淀素，无保护作用。 从患者或患病动物体内分离的毒株成为自然毒株或街毒株（street virus），毒力强；经过脑组织多次传代后，成为固定毒株（fixed virus），毒力弱，可以用于疫苗制备。 第三页，共四十五页。 第三页，共四十五页。 病原学 病毒主要存在于中枢神经系统、唾液腺和唾液内。在唾液腺、海马角、大脑皮层细胞浆内形成嗜酸性包涵体，称为Negri bodies (NB)，是病毒复制和装配的场所。 病毒可以在大鼠、小鼠、家兔和鸡胚等脑组织内增殖、致弱，也可以通过驯化，适应于非脑组织细胞。 第四页，共四十五页。 第四页，共四十五页。 狂犬病疫苗 疫苗：所有用减毒或者杀死的病原生物（包括细菌、病毒、立克次氏体等）或其抗原性物质所制成，用于预防接种的生物制品。 目的：预防、控制疾病（如狂犬病）的发生、流行。 1881年法国巴斯德最早应用连续传代减弱病毒毒力，成功制造出狂犬病疫苗。 目前接种狂犬病疫苗是预防狂犬病唯一有效的手段。由于狂犬病几乎100%的致死性，人用狂犬病疫苗必须是灭活苗。 第五页，共四十五页。 第五页，共四十五页。 狂犬病疫苗的历史 经历五代疫苗 神经组织疫苗 禽胚培养疫苗 细胞培养疫苗 亚单位及精致疫苗 基因工程疫苗 第六页，共四十五页。 第六页，共四十五页。 人用狂犬病疫苗生产流程 细胞制备及培养 接种毒株 培育 收获病毒上清 病毒纯化 病毒灭活 原液检定 分装及冻干 第七页，共四十五页。 第七页，共四十五页。 RV的灭活 病毒对H2O2、KMNO4、新洁尔液、来苏儿、肥皂水、70%酒精、碘酒以及β-丙内酯敏感。 目前通用β-丙内酯来灭活疫苗收获液中的活毒，用量为1:4000，方法：4℃过夜，37℃水浴2h水解残留的β-丙内酯。 第八页，共四十五页。 第八页，共四十五页。 里程碑：分子生物学的诞生 1962 Nobel prize in Physiology or Medicine 第九页，共四十五页。 第九页，共四十五页。 中心法则 蛋白质 第十页，共四十五页。 第十页，共四十五页。 原核生物和真核生物在基因表达上的区别 第十一页，共四十五页。 第十一页，共四十五页。 什么是病毒？ 生物病毒是一类个体微小，结构简单，只含单一核酸（DNA或RNA），必须在活细胞内寄生并以复制方式增殖的非细胞型微生物。 特点：不具细胞结构，具有遗传、复制等生命特征，既无能能量代谢系统也无蛋白质和核酸合成系统…… 第十二页，共四十五页。 第十二页，共四十五页。 病毒的形态 ⑴球状病毒；⑵杆状病毒；⑶砖形病毒；⑷冠状病毒；⑸丝状病毒；⑹链状病毒；⑺有包膜的球状病毒；⑻具有球状头部的病毒；⑼封于包含体内的昆虫病毒等。 病毒粒的对称体制： 病毒粒的对称体制只有两种，即⑴螺旋对称（代表烟草花叶病毒） ⑵二十面体对称（等轴对称，代表腺病毒）。一些结构较复杂的病毒，实质上是上述两种对称相结合的结果，故称作复合对称（代表T偶数噬菌体）。 第十三页，共四十五页。 第十三页，共四十五页。 第十四页，共四十五页。 第十四页，共四十五页。 杆状病毒 HIV 第十五页，共四十五页。 第十五页，共四十五页。 丝状病毒 腺病毒 第十六页，共四十五页。 第十六页，共四十五页。 病毒的分类 从遗传物质分类：DNA病毒、RNA病毒、蛋白质病毒（如：朊病毒）。 从病毒结构分类：真病毒（Euvirus，简称病毒）和亚病毒（Subvirus，包括类病毒、拟病毒、朊病毒）。 从寄主类型分类：噬