血清中FAM83AmRNA表达水平在肺癌诊断中及其对肺癌细胞增殖和迁移的影响.docVIP

血清中FAM83AmRNA表达水平在肺癌诊断中及其对肺癌细胞增殖和迁移的影响 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：血清中FAM83AmRNA表达水平在肺癌诊断中及其对肺癌细胞增殖和迁移的影响 1 1、资料与方法 2 2、结果 4 3、讨论 6 4、结论 8 文2：尿激酶对急性脑梗死患者血清中TNFα表达水平的影响 8 1资料与方法 8 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 12 正文 血清中FAM83AmRNA表达水平在肺癌诊断中及其对肺癌细胞增殖和迁移的影响 文1：血清中FAM83AmRNA表达水平在肺癌诊断中及其对肺癌细胞增殖和迁移的影响 肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和病死率均逐年上升，每年至少有160万的新增病例被确诊为肺癌，严重威胁着人类的健康[1，2]。近年来，虽然大多数癌症的生存率稳步上升，但肺癌的生存率进展缓慢，由于其发病过程隐匿，多数患者在确诊时已经发生局部浸润或转移，而发生远处转移的患者5年生存率仅为%[3，4，5]。因此，了解肺癌发生发展机制，探索新的诊断或治疗靶点成为肺癌领域研究的热门课题。序列相似性为83的家族A成员（FAM83A），又称为BJ-TSA-9，位于染色体8q24上[6]。最近一些研究发现，FAM83A在肺癌[7，8]、乳腺癌[9]和胰腺癌[10]中异常高表达，很有可能成为这些肿瘤诊断或治疗的潜在生物标志物。但FAM83A在肺癌中的临床意义，以及在肺癌细胞中的生物学作用仍不清楚。本研究旨在探讨肺癌患者血清中FAM83AmRNA的表达水平及临床意义，进一步分析干扰FAM83A表达对肺癌细胞增殖、转移和侵袭能力的影响，为肺癌的诊断提供新的标志物，也为肺癌的靶向治疗提供潜在的靶点。 1、资料与方法 一般资料 选取2017年8月至2019年8月在南京医科大学附属逸夫医院医院确诊为原发性肺癌的患者102例为研究对象，其中男58例，女44例，在入组前患者均未接受放疗、化疗等治疗。患者的诊断和临床病理特征包括肿瘤大小、TNM分期和淋巴结转移均经过两位以上病理学医生确认。选取同期在医院进行体检的健康人员98例作为对照组，其中男45例，女53例。所有入组人员均签署知情同意书。所有参与者抽取静脉血5mL用于分离血清检测FAM83A。 仪器与试剂 MTT检测试剂盒购自上海碧云天公司；Lipofectamine2000转染试剂购自美国Invitrogen公司；逆转录试剂盒和定量PCR试剂盒购自Takara公司；Trawell小室和Matrigel胶购自美国BD公司；FAM83A和GAPDH单克隆抗体购自美国CellSignalingTechnology公司；ABIPRISM7500定量PCR仪购自美国ABI公司。 方法 利用生物信息学在线工具“GEPIA”(http：）分析FAM83A在肺癌组织和正常组织中的表达。 培养肺癌细胞A549和SK-MES-1，取对数生长期的细胞按照Lipofectamine2000转染试剂说明书转染si-FAM83A。在转染中设置siRNA-NC(si-NC）对照组，si-FAM83A-1组，siFAM83A-2组，荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）确定转染效率。siRNA序列如下，si-FAM83A-1:5′-GCACAACAACATCAGAGACCT-3′；siFAM83A-2:5′-GACTGGAGATTTGTCCTGTCT-3′；si-NC:5′-UUCUCCGAACGUGUCACGU-3′ -PCR检测FAM83AmRNA的表达 Trizol试剂提取各组细胞标本中的总RNA。将RNA逆转录成cDNA并进行qRT-PCR检测。扩增引物序列如下：FAM83A上游引物为5′-CCCATCTCAGTCACTGGCATT-3′，下游引物为5′-CCGCCAACATCTCCTTGTTC-3′；GAPDH上游引物为5′-AATGAAGGGGTCATTGATGG-3′，下游引物为5′-AAGGTGAAGGTCGGAGTCAA-3′。以GAPDH作为内参，结果以2-ΔΔCt法进行相对定量表示。实验重复3次。 提取各组细胞中的总蛋白，BCA法定量蛋白浓度，然后对蛋白进行SDS凝胶电泳、转模、封闭，随后加入一抗（FAM83A按1∶1000稀释，或GAPDH按1∶3000稀释）4℃反应过夜。TBST漂洗膜3次后加入HRP标记二抗，室温条件下反应2h。然后TBST漂洗膜3次，最后用ECL化学发光试剂盒进行蛋白显影，化学发光成像系统成像检测蛋白质印迹条带。 将转染si-FAM83A或si-NC的肺癌细胞A549和SK-MES-1细胞接种至96孔板中，随后按MT