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质粒的基本知识 染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb不等， 共价闭合环状，超螺旋 具有自主复制和转录能力，能在子代细胞中 保持恒定的拷贝数，并表达所带的遗传信息。 质粒的存在使宿主具有一些额外的特性， 如对抗生素的抗性等。 质粒拷贝数 质粒种类 拷贝数 复制起始点 拷贝类型 质 粒 pUC18/19 载体 500–700 pMB1 高拷贝 pBluescript载体 300–500 ColE1 高拷贝 pGM－T 载体 300–400 pMB1 高拷贝 pTZ载体 1000 pMB1 高拷贝 pBR322载体 15–20 pMB1 低拷贝 pACYC 及其衍生载 10–12 p15A 低拷贝 体 pSC101 及其衍生载 ~5 pSC101 低拷贝 体 粘 粒 SuperCos 10–20 ColE1 低拷贝 pWE15 10–20 ColE1 低拷贝 抗生素 工作浓度 抗生素 贮液浓度 保存条件 严紧型质粒 松弛型质粒 氨苄青霉素 50mg/ml(溶于水) －20℃ 20μg/ml 100μg/ml 羧苄青霉素 50mg/ml(溶于水) －20℃ 20μg/ml 100μg/ml 氯霉素 34mg/ml(溶于无水乙醇) －20℃ 34μg/ml 170μg/ml 卡那霉素 10mg/ml(溶于水) －20℃ 10μg/ml 50μg/ml 链霉素 10mg/ml(溶于水) －20℃ 10μg/ml 50μg/ml 四环素 5mg/ml(溶于无水乙醇) －20℃ 10μg/ml 50μg/ml 质粒DNA提取方法 碱裂解法 煮沸法 CsCl法 高浓度NaCl法 双相法（聚乙二醇、葡聚糖二相） 碱裂解法原理 根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA 的结构差异来实现分离。 在pH12-12.5 时，线性DNA 被彻底变性；共价闭环质粒DNA 变性但两条互补链仍 会紧密缠绕结合在一起。 当溶液恢复中性，质粒DNA迅速复性，染色体DNA不能复性，从而离心即可以把 变性的染色体DNA沉淀和蛋白-SDS复合物沉淀分离出来。 实验者关心的因素 质粒的纯度－－与下游反应密切相 得率－－根据个人需要选择不同的纯化量 速度/方便性 经济性 质粒DNA提取试剂盒 每个离心柱处理的菌液量依据不同试剂盒中的吸附柱类型而定 RNAase溶液(10mg/ml) 平衡液BL 溶液P1、P2、P3 漂洗液PW 洗脱缓冲液EB 吸附柱(CB3、CB4、CB5) 收集管 质粒DNA提取试剂盒 小提 小提中量 高纯度小提 高纯度小提质粒大提 酵母 中量 1-5ml 5-15ml 1-5ml 5-15ml