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研究环杷明抑制肝星形细胞激活在改善肝纤维化中的作用 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：研究环杷明抑制肝星形细胞激活在改善肝纤维化中的作用 1 2研究方法 3 3统计学方法 4 1环杷明可显著抑制CCl4诱导的肝损伤和纤维化 4 2环杷明可显著抑制肝星状细胞激活和肝血管生成 4 3环杷明可显著抑制血管形成和纤维化相关蛋白表达 5 文2：肝星形细胞与肝纤维化的研究进展 6 1 HSC的一般性质和功能［8］ 7 2 HSC的活化 8 3 HSC在HF恢复期的作用 10 4 HSC的凋亡及其调控 10 5 目前针对HSC的抗肝纤维化 治疗 14 6 展望 15 参考文摘引言： 16 原创性声明（模板） 17 文章致谢（模板） 17 正文 研究环杷明抑制肝星形细胞激活在改善肝纤维化中的作用 文1：研究环杷明抑制肝星形细胞激活在改善肝纤维化中的作用 肝纤维化是肝脏对反复发生的慢性肝损伤的治愈过程，包括病毒感染、胆汁淤积性肝病、酗酒、非酒精性脂肪性肝炎、非酒精性脂肪肝以及一些药物的副作用[1，2，3]。其特点是细胞外基质(ECM)过度沉积，形成纤维性瘢痕，引起肝功能障碍，可能发展为肝硬化和肝癌。幸运的是，如果去除主要的致病因素，肝纤维化是一个可逆的过程，但这总是困难和费时的。目前治疗肝纤维化最有效的方法是肝移植。然而，由于器官供体的限制，肝移植并不普及。因此，有必要寻找一种新的治疗肝纤维化的药物，以减轻肝功能障碍和减少并发症[4，5] 对肝纤维化的发病机制研究发现，肝星状细胞(Hepaticstellatecell，HSCs)的活化是其发病的关键。在健康的肝脏中，HSCs定位于Disse空间，具有静止表型(qHSCs)[4];当肝脏损伤刺激后，Kupffer细胞和其他间充质细胞被激活并分泌多种促纤维化细胞因子，包括转化生长因子β1(TGF-β1)、血小板衍生生长因子(PDGF)和表皮生长因子(EGF)，导致肝星状细胞的激活。激活的HSCs(aHSCs)经过一系列的活化反应，导致ECM过度积聚和肝纤维化[6]。除ECM沉积外，肝损伤与血管生成有关。此外，由于组织缺氧，血管生成和纤维生成总是与慢性肝病并行发展。病理性血管生成加剧了结构紊乱，而不是缓解。据报道，酪氨酸激酶抑制剂，如舒尼替尼或索拉非尼抑制血管生成，可改善啮齿类动物的肝纤维化。因此，血管生成也是治疗肝纤维化的重要靶点[7] 环杷明是一种从藜芦属植物中提取的甾体生物碱，在大量的临床前研究中显示出了良好的抗癌作用。它是Hedgehog(HH)信号通路的抑制剂。HH信号通路的异常激活导致了多种人类疾病的发生，如结直肠癌、肺癌和乳腺癌[8]。临床上我们发现环杷明对肝纤维化具有调控作用，但具体调控作用机制不清楚。因此本研究的目的在于阐明环杷明对肝纤维化的调控作用机制。 材料和方法 1材料 戊巴比妥钠盐、环杷明、磷酸盐缓冲液(PBS)、维生素D3、白藜芦醇、姜黄素购买于Sigma-Aldrich(MerckKGaA)。无水乙醇、二甲苯、Masson染液套装、分化液、HE染液、中性树胶、CCl4购于中国国药控股国际公司。GAPDH、α-SMA、CollagenⅠ、TGF-β1、ALT试剂盒和AST试剂盒购于SANTACRUZBIOTECHNOLOGY。 2研究方法 肝纤维化小鼠模型构建和药物干预: 准备20%CCl4的油剂溶液(CCl4∶橄榄油=1∶4)，3d一次对小鼠进行皮下注射，注射量按5ml/kg进行，连续4周;对照组注射同等剂量橄榄油溶剂。 第4周开始，对模型组分别进行环杷明5或10mg/(kg·d)皮下注射、维生素D33ng/(100g·d)皮下注射、白藜芦醇200mg/(kg·d)灌胃、姜黄素400mg/(kg·d)灌胃。第8周，戊巴比妥钠腹腔注射麻醉小鼠，眼眶取血后常温放置30min，1800min离心5min取上清，冷冻-80℃保存;取肝组织分别进行4%多聚甲醛固定和-80℃冷冻保存。 生化指标检测: 小鼠血清ALT和AST检测按照说明书进行操作。 免疫组化检测: 对固定的肝脏组织进行切片和石蜡包埋，并切成4μm厚的切片，进行CD31、α-SMA和Masson染色。显微镜镜检，图像采集分析。 提取总蛋白，标定后进行SDS电泳、转膜、封闭，然后进行VEGF、CD31、α-SMA、CollagenⅠ和TGF-β1染色，对结果进行拍照、收集、分析。GAPDH为内参蛋白。 3统计学方法 连续变量用均数±标准差表示。使用GraphPadPrism软件版(GraphPad，LaJolla，CA，USA)对多组比较进行单向方差分析。P为差异有统计学意义。