4.汉防己中生物碱的提取、分离和鉴定.pdf

实验名称 实验四 汉防己中生物碱的提取、分离和鉴定 实验班级 实验课时间 课时数 10 分组 10 实验目的： 1．掌握一般叔胺生物总碱的提取和纯化方法。 2．熟悉柱色谱法分离生物碱的操作技术。 3．掌握生物碱的鉴定方法。 实验原理： 根据大多数生物碱或生物碱盐均能溶于乙醇的通性，利用乙醇提取总生物 碱。利用季铵型生物碱易溶于水，不溶于亲脂性有机溶剂的性质，用溶剂萃取法 分离脂溶性生物碱和水溶性生物碱；根据汉防己甲素和乙素和酸结合成盐而易溶 于水，难溶于亲脂性试剂，在碱性条件下易溶于亲脂性试剂不溶于水的性质反复 处理后，再利用两者在冷苯中溶解度的不同，使它们相互分离。或者利用两者的 极性不同，利用柱层析进行分离。 OMe HC N N CH 3 OR 3 汉防己甲素 R=CH O 3 汉防己乙素 R=H O OMe 实验试药与器材： 试药：汉防己、85%乙醇、1%盐酸、氯仿、氨水、1%氢氧化钠、无水硫酸钠、氧 化铝、丙酮、环己烷、甲醇、改良碘化铋钾试剂、碘-碘化钾试剂、碘化 汞钾试剂、硅钨酸试剂等 器材：回流装置、圆底烧瓶、分液漏斗、层析柱、漏斗、薄层板、乳钵、量筒、 烧杯、试管等 实验内容与方法： 一、总生物碱的提取 取汉防己粉末100g，置于500ml圆底烧瓶中，加85%乙醇300ml，水浴加热 回流1小时，滤出乙醇提取液；药渣重新加入85%乙醇200ml 同法提取1次，合 并两次提取液，过滤，浓缩至无醇味，成糖浆状，得到总生物碱。 二、精制 将上述糖浆状提取液转入烧杯中，加1%盐酸调PH为2，边加边搅拌，静置， 过滤，得澄明滤液。滤液加等体积氯仿，再加氨水调PH为10以上，于分液漏斗 中振摇萃取，静置分层后放出氯仿层，碱液再用氯仿萃取两次，合并氯仿液。氯 仿液置于分液漏斗中，先以 1%氢氧化钠溶液洗 2 次，再用水洗2-3 次后加入约 5g无水硫酸钠脱水，放置过夜，过滤，回收氯仿至少量，得汉防己总碱。 三、汉防己甲素和汉防己乙素的分离 1．装柱 取层析柱垂直固定在铁架台上，在管的下端垫入少量棉花，称取中性 氧化铝100 目20g，缓缓加入层析柱中，边加边轻轻振动色谱柱，使氧化铝在柱 中填实均匀。 2．上样 取 100mg汉防己总碱置于小蒸发皿中，用少量丙酮溶解，另加 0.5g 色谱用氧化铝（作吸附剂），搅拌均匀，并于水浴上缓缓蒸去溶剂。然后将含有 样品的氧化铝装入色谱柱的上端，并盖一圆形滤纸。 3．洗脱 将色谱柱活塞打开，以正己烷-丙酮（4 ∶1）洗脱，流速控制在5ml/min， 收集各流分（10ml～15ml/份）。 4．检查 将各流分回收溶剂，依次点于硅胶 G-CMC-Na 薄层板上，用氯仿— 丙酮—甲醇（6 ∶1∶1）为展开剂，展开，喷以改良碘化铋钾试剂，比较各流分 的R 值，合并相同R 值的流分。 f f 5．结晶 将合并流分的溶液浓缩至适当体积，放置，析晶，滴加少量丙酮洗涤 结晶，可得汉防己甲素、汉防己乙素结晶。 四、检识 1．化学检识 将提取的氯仿液，用1%的盐酸萃取，得盐酸溶液10毫升，分为四个小试管 储存，分别在四个小试管中加入改良碘化铋钾、碘-碘化钾、碘化汞钾、硅钨酸 试剂，观察各试管中的变化，记录在如下表格中。 改良碘化铋钾 碘-碘化钾 碘化汞钾 硅钨酸 汉防己生物碱 空白 2．色谱检识 色谱材料：硅胶G-CMC-