《食品微生物学检验》课件 18 产气荚膜梭状芽孢杆菌检验 (2).pptVIP

http://www2.bc.cc.ca.us/bio16/images/Clostperfapi.jpg Clostridium perfringens * 复习题 1、食品中产气荚膜梭菌检验的主要目标就验食品被该菌污染的程度，因此，其检验的重点项目是活菌数测定及证实试验。气荚膜梭菌能分解乳糖，引起牛乳暴发酵，这是鉴别该菌的要点。该菌在胰胨-亚硫酸盐-环丝氨酸（TSC）琼脂上生长，能将亚硫酸盐还原为硫化物，在含亚硫酸盐及铁盐(含有柠檬酸铁胺)的琼脂中形成黑色菌落，TSC作分离培养和计数用. 2、对产气荚膜梭菌的检验程序进行说明。 * 问题 1、讲了几种芽胞杆菌？芽胞特点－菌体特点？对空气的需求？鞭毛（魏无鞭毛，有荚膜；蜡样芽胞杆菌周鞭毛；肉毒周鞭毛无荚膜） 2、肉毒以检验出毒素为确定，魏氏梭菌以计数和菌种验证为报告结果。 * 总结 检验菌种 细菌特性 检验步骤 沙门氏菌（Salmonella） 肠道致病菌，G- 短杆菌，消毒剂有一定抵抗力 前增菌→选择性增菌→平板分离→生化鉴定→血清学鉴定 志贺氏菌（Shigella） 肠道致病菌，G- 短杆菌，生化反应不活泼 前增菌→选择性平板分离→初步生化鉴定→血清学和进一步生化鉴定 空肠弯曲菌 （Campylobacter jejuni） 肠道致病菌，G-弧形，微需氧杆菌，生化反应不活泼 预增菌→增菌→平板分离→弯曲杆菌鉴定→空肠弯曲杆菌鉴定 小肠结肠炎耶尔森氏菌 （Yersinia enterocolitica） 肠道致病菌，G-无芽孢，无荚膜周身鞭毛的球杆菌 增菌→碱处理→平板分离→克氏双糖和尿素酶→运动性和镜检→生化和血清学鉴定 产气荚膜梭菌 （Clostridium perfringens） 致病性芽孢杆菌，G+无鞭毛可形成荚膜和芽胞的大杆菌 检样处理和稀释→平板计数→验证试验（镜检、牛奶发酵、动力-硝酸盐、乳糖-明胶） * 4. GB/T 4789.4-2010 沙门氏菌检验程序 前增菌：用无选择性的培养基使处于濒死状态的细菌恢复活力；BPW 选择性增菌：使沙门氏菌优势增殖，其它细菌受到抑制；SC+TTB 选择性平板分离培养：BS+XLD/HE/沙氏显色培养基 生化试验：鉴定分离出的细菌是否符合沙门氏菌的生化谱，可采用API20E等成套生化试剂 血清学鉴定：特异性诊断血清鉴定到种 其他显色培养基 * 前增菌 初步生化试验；TSI+半固体 血清学分型和 进一步生化试验 大部分是普通的S型小菌落 8(5). GB/T 4789.5-2012 志贺氏菌检验程序 选择性鉴别培养基分离；XLD+MAC/显色培养基 * 24 h～48 h 图1 空肠弯曲菌检验程序 样品处理 预增菌 接种Skirrow 与mCCDA琼脂平板 镜 检 动力试验 氧化酶 试验 弯曲菌属 过氧化氢酶试验 萘啶酮酸 敏感试验 马尿酸钠 水解试验 报 告 挑取可疑菌落，接种哥伦比亚琼脂平板 头孢菌素 敏感试验 36 ℃±1 ℃ 4 h 42 ℃±1 ℃ 42 ℃±1 ℃ 24 h～48 h 42 ℃±1 ℃ 24 h～48 h 增菌 微需氧25℃±1 ℃ 生长试验 有氧42℃±1 ℃ 生长试验 吲哚乙酸脂水解试验 空肠弯曲菌属 呈螺旋状运动 ＋ 不生长 不生长 （＋） （＋） （＋） R抗性 S敏感； 操作步骤 1.样品处理 2.预增菌和增菌 3.分离 4.鉴定 5.结果报告 （1）第一法：常规培养法 * 耐碱 牛眼样菌落 无色透明、 不粘稠的菌落 斜面和底部都变黄 阳性 红色 小肠结肠炎尔森菌检验程序 ＋ * 革兰氏阴性球杆菌 26℃ 24h，有鞭毛，有动力 37℃ 24h，无鞭毛，无动力 * 镜检形态 检样 25g（ml）样品＋ 225mL 0.1% 蛋白胨水 任选黑色菌落5个，分别接种FTG培养基 厌氧培养， 36?1℃，20h~24h，黑色菌落计数 乳糖-明胶 报告 均质、稀释 10-1~10-6 稀释液各1mL+TSC琼脂混合 确证试验 牛奶发酵 动力-硝酸盐 5.检验程序 胰胨-亚硫酸盐 -环丝氨酸(TSC)琼脂 液体硫乙醇酸盐(FTG) 46℃,2～5h 爆发酵 36℃,24h ＋ 36℃,24h ＋ * 第五章 致病性的芽孢杆菌检验 第一节 肉毒梭菌及肉毒毒素检验 第二节 蜡样芽孢杆菌检验 第三节 产气荚膜梭菌检验 *  食品安全国家标准食品微生物学检验 产气荚膜梭菌检验 Microbiological examination : Clostridium perfringens GBT 4789.13-2012 * Clostridium perfringens x10,000 /i?ct