《食品微生物学检验》课件 单增李斯特菌.pptVIP

2.分离 取 LB 2 二次增菌液划线接种于 PALCAM 琼脂平板和李斯特氏菌显色培养基上，于 36 ℃±1 ℃培养24 h～48 h，观察各个平板上生长的菌落。典型菌落在 PALCAM 琼脂平板上为小的圆形灰绿色菌落，周围有棕黑色水解圈， 有些菌落有黑色凹陷； 典型菌落在李斯特氏菌显色培养基上的特征按照产品说明进行判定。 * 分离培养基的比较和筛选 方法 培养基 原国标 MMA AFNOR OXA、PALCAM FDA MMA、OXA、LPM USDA MOX Health Welfare Canada PALCAM、OXA * MMA PALCAM OXA CHROMagar 30℃48h菌落针尖大小、形态不典型，与杂菌难区分抑制性强 37℃24h－48h，2mm灰绿色中心黑色凹陷，菌落周围呈棕黑色水解圈 30℃24h－48h,2mm灰黑色菌落周围呈棕黑色水解圈 37℃18h-24h,蓝色菌落周围呈白色晕圈 * 氯化锂和其它的抗生素能抑制革兰氏阴性菌和大多数革兰氏阳性菌 PALCAM 配方 酵母膏 8.0 g 葡萄糖 0.5 g 七叶苷 0.8 g 柠檬酸铁胺 0.5 g 甘露醇 10.0g 酚红 0.1 g 氯化锂 15.0g 酪蛋白胰酶消化物 10.0 g 心胰酶消化物 3.0 g 玉米淀粉 1.0 ml 肉胃酶消化物 5.0 ml 氯化钠 5.0 ml 琼脂 15.0 ml 蒸馏水 1000ml pH 7.2~7.4 PALCAM琼脂 作用：选择性平板分离。 典型菌落在PALCAM琼脂平板上为小的圆形灰绿色菌落，周围有棕黑色水解圈，有些菌落有黑色凹陷。 李斯特氏菌水解七叶苷与铁离子反应形成黑色的6,7-二羟基香豆素 * 3.初筛 自选择性琼脂平板上分别挑取 3个~5 个以上典型或可疑菌落，分别接种在木糖、鼠李糖发酵管，于 36℃±1 ℃培养 24 h；同时在 TSA-YE 平板上划线纯化，于 36 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h。选择木糖阴性、鼠李糖阳性的纯培养物继续进行鉴定。 * 4. 鉴定（或选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物鉴定系统等） （1）染色镜检：李斯特氏菌为革兰氏阳性短杆菌，大小为（0.4 μm～0.5 μm）×（0.5 μm～2.0 μm） ； 用生理盐水制成菌悬液，在油镜或相差显微镜下观察，该菌出现轻微旋转或翻滚样的运动。 （2） 动力试验：李斯特氏菌有动力，呈伞状生长或月牙状生长。 （3）生化鉴定：挑取纯培养的单个可疑菌落，进行过氧化氢酶试验， 过氧化氢酶阳性反应的菌落继续 进行糖发酵试验和 MR-VP 试验。 单核细胞增生李斯特氏菌的主要生化特征见表 1。 * 菌种 溶血反应 协同溶血 葡萄糖 麦芽糖 MR-VP 甘露醇 鼠李糖 木糖 七叶苷 单核细胞增生李斯特氏菌(L.monocytogenes) ＋ ＋ ＋ ＋ ＋/＋ － ＋ － ＋ 格氏李斯特氏菌 (L.grayi) － － ＋ ＋ ＋/＋ ＋ － － ＋ 斯氏李斯特氏菌(L.seeligeri) ＋ ＋ ＋ ＋ ＋/＋ － － ＋ ＋ 威氏李斯特氏菌(L.welshimeri) － － ＋ ＋ ＋/＋ － V ＋ ＋ 伊氏李斯特氏菌(L.ivanovii) ＋ ＋ ＋ ＋ ＋/＋ － － ＋ ＋ 英诺克李斯特氏菌(L.innocua) － － ＋ ＋ ＋/＋ － V － ＋ 注：＋阳性；－阴性；V反应不定。 表1 单核增生李斯特菌生化特征和其它李斯特菌的区别 * （4） 溶血试验 将羊血琼脂平板底面划分为 20 个～25 个小格，挑取纯培养的单个可疑菌落刺种到血 平板上， 每格刺种一个菌落， 并刺种阳性对照菌