《食品微生物学检验》课件 空肠弯曲菌检验.pptVIP

mCCD琼脂平板上的可疑菌落通常有光泽、潮湿、扁平，呈扩散生长的倾向，直径约为1mm～2mm。 Skirrow琼脂平板上的可疑菌落为灰色、扁平、湿润有光泽，呈沿接种线向外扩散的倾向；有些可疑菌落常呈分散凸起的单个菌落，直径约为lmm～2mm，边缘整齐、发亮。 www.microbiologyatlas.kvl.dk/bio...juni.jpg www.microbiologyatlas.kvl.dk/bio...gen1.jpg 鉴定 弯曲菌属的鉴定 挑取5个或更多的可疑菌落接种到哥伦比亚血琼脂平板上，微需氧条件下42℃±1℃培养24h～48h，按照表1进行鉴定，结果符合表1的可疑菌落确定为弯曲菌属。 项目 弯曲菌属特性 形态观察 革兰氏阴性，菌体弯曲如小逗点状，两菌体的末端相接时呈S形、螺旋状或海鸥展翅状a 动力观察 呈螺旋状运动b 氧化酶实验 阳性 微需氧条件下25℃±1℃生长试验 不生长 有氧条件下42℃±1℃生长试验 不生长 a有些菌株的形态不典型。b有些菌株的运动不明显。 表1 弯曲菌属的鉴定 形态观察 挑取可疑菌落进行革兰氏染色，镜检。 动力观察 挑取可疑菌落用1mL布氏肉汤悬浮，用相差显微镜观察运动状态。 Campylobacter jejuni from a culture (Gram stain, ×1000). t.nz/mafnet/rural-nz/...pyl8.jpg 氧化酶试验 用铂/铱接种环或玻璃棒挑取可疑菌落至氧化酶试剂润湿的滤纸上，如果在10s内出现紫红色、紫罗兰或深蓝色为阳性。 微需氧条件下25℃±1℃生长试验 － 挑取可疑菌落，接种到哥伦比亚琼脂平板上，微需氧条件下25℃±1℃培养44h±4h，观察细菌生长情况。 有氧条件下42℃±1℃生长试验（—） 挑取可疑菌落，接种到哥伦比亚琼脂平板上，有氧条件下42℃±1℃培养44h±4h，观察细菌生长情况。 空肠弯曲菌的鉴定 过氧化氢酶试验（＋）：挑取菌落，加到干净玻片上的3％过氧化氢溶液中，如果在30s内出现气泡则判定结果为阳性。 马尿酸钠水解试验（＋） ：挑取菌落，加到盛有0.4mL 1％马尿酸钠的试管中制成菌悬液。混合均匀后在36℃±1℃水浴放置2h或36℃±1℃培养箱中放置4h。沿着试管壁缓缓加入0.2mL 茚三酮溶液，不要振荡，在36℃±l℃的水浴或培养箱中放置10min后判读结果。若出现深紫色则为阳性；若出现淡紫色或没有颜色变化则为阴性。 吲哚乙酸酯水解试验（＋）：挑取菌落至吲哚乙酸醋纸片上，再滴加一滴灭菌水。如果吲哚乙酸醋水解，则在5min～10min内出现深蓝色；若无颜色变化则没有发生水解。 特征 空肠弯曲菌 （C. jejuni） 结肠弯曲菌 （C. coli） 海鸥弯曲菌 （C. lari） 乌普萨拉弯曲菌 （C. upsaliensis） 过氧化氢酶试验 ＋ ＋ ＋ －或微弱 马尿酸盐水解试验 ＋ － － － 吲哚乙酸脂水解试验 ＋ ＋ － ＋ 注：＋阳性；－阴性。 表2 空肠弯曲菌的鉴定 替代试验 对于确定为弯曲菌属的菌落，可使用生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡代替~进行鉴定。 The VITEK 2 System and Test Cards originated with the NASA space program to /upload/VI...ts-1.jpg 结果报告 综合以上试验结果，报告检样单位中检出空肠弯曲菌或未检出空肠弯曲菌。 第三章 食品中肠道致病菌检验 第一节 沙门氏菌检验 第二节 志贺氏菌检验 第三节 致泻性大肠埃希氏菌检验 第四节 小肠结肠炎耶尔森菌检验 第五节 副溶血性弧菌检验 第六节 空肠弯曲菌检验 第六节 空肠弯曲菌检验 食品安全国家标准 食品微生物学检验—空肠弯曲菌检验 Food microbiological examination — Campylobacter jejuni GB/T 4789.9 --2014 代替GB/T 4789.9--2008、2003 概述 1）空肠弯曲菌分类地位 螺菌科 弯曲菌属 空肠 弯曲菌 芬奈尔 弯曲菌 猪 弯曲菌 结肠 弯曲菌 同性恋 弯曲菌 短暂 弯曲菌 胎儿 弯曲菌 海鸥 弯曲菌 胎儿亚种 口腔亚种 等等 13个种 螺菌科 弯曲菌属 其中空肠弯曲杆菌对 食品安全的威胁最严重。 Campylobacter is one of the most common causes of human gastroenteritis