临床微生物质量控制培训.ppt

呼吸道标本细菌培养 标本留取质量的好坏直接影响到对呼吸道病原学的诊断 标本的采集要尽量减少上呼吸道正常菌群干扰 应在用药前或停药1天后留取标本。 泌尿道标本细菌培养 应在用药前或停药5天后留取标本, 并使尿液在膀胱内停留6～8h以上。 尽量避免或减少尿道口正常菌群干扰。 清洁中段尿、导尿导管尿、经耻骨上皮肤穿刺采集膀胱内尿液，送检标本以晨起第一次尿液为佳 尿量不宜太多，试管塞子与尿液不应直接接触 留取导尿管尿要排空导尿管内陈旧尿液，倘留置尿管超过三天应避免采用。 标本采集后立即送检，不能立即送检者，可暂存4℃冰箱，但保存不超过8h 粪便标本的培养 应在发病早期并且尽量在用抗生素治疗前采集，稀便不少于1ml，固体便不少于1克，无便患者可用直肠拭子采集标本。 要挑取含脓、黏液、血等病理改变或水样粪便送检。直肠拭子采样量要足够，拭子上肉眼应可见粪便。 注意事项： ⑴虽然粪便标本本身含很多细菌但也要用无菌容器。 ⑵厌氧细菌（难辩梭菌）培养的标本应尽量减少与空气接触。 ⑶注意挑取脓血便或粘液便做培养 ⑷要进行分区划线。如图所示。 分泌物的培养 1. 对开放性病灶的采集：如眼结膜脓性分泌物、扁桃体、外耳道、手术后切口、导管治疗感染、瘘管内脓液、生殖道分泌物等均属于开放性病灶。应先用灭菌生理盐水冲洗表面污染菌，去除旧的分泌物，用灭菌拭子采集病灶深部的分泌物，也可取感染部位下的组织送检。 2. 闭锁性脓肿：如淋巴脓肿、肺脓肿、肝脓肿、腹腔脓肿、盆腔脓肿等，对封闭的脓肿常采用穿刺或引流的的方法采样，应在用药前采集，应注意脓液的气味、性状、颜色注意厌氧菌存在的可能。不能及时送检应应用输送培养基。 脓液标本 　 要尽量避免病灶表面细菌污染。开放性脓肿，采样前无菌盐水冲洗伤口，拭去表面污染脓液，挑取病灶深部脓液；封闭性脓液，严格病灶皮肤或黏膜表面的消毒后用无菌干燥注射器穿刺抽取，置无菌试管内送检，或切开排脓时用无菌拭子采集深部脓液。 厌氧菌和伤口标本 厌氧菌标本 ? 隔绝空气-氧对厌氧菌有毒性作用 ?液状标本应用注射器抽取密封送检 ?分泌物标本最好床边采集床边接种；另置厌氧环境送检（输送培养基） 伤口标本 ?在伤口切开排脓时留取标本 ?不能在伤口消毒清洗后留取标本 ?尽量采集伤口深部的脓汁送检 脑脊液标本 直接涂片：革兰染色、抗酸染色、印度墨汁染色 无菌采集技术：避免标本污染及患者被感染 病毒培养标本：置4 ℃保存 分枝杆菌培养标本：2mL以上，置4 ℃保存 细菌培养标本置35 ℃保存 种类和环节多（细菌鉴定、药敏、培养基、生化管、仪器、稀释液） 涉及知识面广 复杂性高 需要强烈的责任感 四、微生物试验分析中质量控制 常规试验的质量控制-天天做（质控菌株） 触酶试验：3％H2O2每三天更换一次 血浆凝固酶试验：人血浆或商品乳胶试剂 氧化酶试验：1％盐酸四甲基对苯胺水溶液浸泡厚滤纸，室温吹干压成小纸片，置含干燥剂容器－20℃保存，或买商品制剂 β－内酰胺酶：头孢硝噻吩(Nitrocefin)为底物，适于测试嗜血杆菌、淋球菌、卡他莫拉菌、肠球菌 革兰染色：革兰阳性菌染成紫色；革兰阴性菌染成红色；另涂片厚度、染色和脱色时间、染料沉渣等也影响染色质量 培养基的质量控制 一般性状：①外观：透明、清亮、无混浊、无沉淀，颜色符合要求，表面湿润但无水汽、平整、光洁无凹坑和气泡。整块平板厚薄均匀。②厚度：一般厚度在3mm，但MH平板厚度≥4mm。斜面的长度≤试管长度的2/3。③pH是细菌生长的重要条件之一，合格培养基的pH应在规定值上下0.2的范围内。 无菌试验：新制备或新买的培养基在使用前要随机抽取一定数量的样品作无菌试验。 购买的培养基要有质量保证如合格证明等文件；若无质量保证需检测相应的性能。 培养基的质量控制 细菌生长试验：所有的培养基在使用前还必须做细菌生长试验以测定培养基性能是否符合要求。标准菌株分2种：一种是已知的可在某种培养基上生长并产生典型生物学性状的，对培养基中的某种物质产生阳性反应的菌株；另一种是用已知的不能在某种培养基上生长或对培养基中的某种物质产生阴性生化反应的菌株。如血琼脂平板：乙型溶血性链球菌生长，β 溶血；甲型链球菌，a溶血；巧克力琼脂平板：流感嗜血杆菌生长良好；中国蓝琼脂平板和SS琼脂平板：革兰阴性菌生长，革兰阳性菌不生长。 试剂质控 临床微生物实验室常用的试剂包括染色液、诊断血清以及各种生化反应试剂等。 染色液及染色方法质量控制：购买的或配置的染色液，每次需做好相关的记录，如操作者和开瓶日期等；还要进行染色步骤质控，如革兰染色在一张玻片上同时涂有金葡菌和大肠杆菌，以保证染色性判断准确无误。 常用生化试剂的质控：随着细菌鉴定仪和快速微量生化鉴定板条的普及，临床微生物检验常用的生化试剂种类日趋减少，应注意