感染性疾病分子诊断演示文稿.pptVIP

第二节 病原菌的基因检测 细菌广泛分布于自然界。在人的体表和与外界相通的口腔、鼻咽腔、肠道、泌尿生殖道等存在着不同种类和数量的细菌。人体免疫功能正常时，某些寄居在正常人体的细菌对人无害，属于正常菌群。正常菌群与人体之间的平衡受某些条件的破坏可导致疾病，此时这些细菌为条件致病菌。另一些细菌因其本身所具有的毒性及侵袭力，一旦进入人体将会造成人体的感染，统称为病原菌。 第六十三页，共九十九页。 病原菌的诊断方法有直接涂片镜检、分离培养、生化试验、血清学试验和动物试验等，但由于细菌培养周期较长等种种原因，尚不能令人满意。分子诊断技术的应用将使细菌感染的诊断出现一个质的飞跃，同时可将分子诊断技术用于细菌分型、耐药性的检测中。 第六十四页，共九十九页。 一、淋球菌 淋球菌(gonococcus)又名淋病耐瑟氏菌(neisseria gonorrhoeae, NG)，是淋病的病原菌。 第六十五页，共九十九页。 （一）细菌基因组结构 淋球菌染色体可编码约5000个基因，仅为大肠埃希菌基因组的1/3，其G+C含量为52%。 （二）分子诊断方法 1. PCR 2. LCR 可采用连接酶链式反应(ligase chain reaction, LCR)检测淋球菌DNA。 第六十六页，共九十九页。 （三）临床意义 1. 对分离培养的菌株进行鉴定和进一步分析。 2. 用于抗生素治疗的疗效观察及监控。 3. 提高临床标本检测的阳性率和准确性。 4. 对淋球菌菌株进行分子流行病学分析。 5. 对疑为淋球菌引起的疾病的诊断和鉴别诊断具有决定性作用。 第六十七页，共九十九页。 结核分枝杆菌 结核分枝杆菌1882年由Robert Koch发现，对人致病的主要是人型结核分枝杆菌，引起结核病。伴随艾滋病的流行、免疫抑制剂的应用等，结核病发病率逐年上升，免疫低下个体特别是HIV感染者更易于感染结核分枝杆菌。尽管存在有效短程化学疗法和卡介苗接种等方法防治，TB仍然是威胁人类生命最严重的感染性病原。1993年，WHO宣布结核病是一个全球性危机。 第六十八页，共九十九页。 目前临床上常用的结核病诊断方法有细菌学涂片抗酸染色、活检病理诊断和体液或组织培养。 细菌学涂片和活检病理抗酸染色找到抗酸杆菌可以确诊结核，但是阳性率很低，而且不能区别结核杆菌和不典型结核杆菌。另外麻风杆菌也可以表现为抗酸染色阳性。体液或活检组织的分枝杆菌培养阳性可明确诊断结核及菌型，但是培养时间长，且阳性率非常低。虽然新的培养法BACTEC 法显著缩短了培养、菌型鉴定结果的报告时间，但由于该法使用放射性底物而使它的应用受到了限制。并且有些类型分枝杆菌不能在培养基中生长。 第六十九页，共九十九页。 结核病的历史 第七十页，共九十九页。 二、丙型肝炎病毒 丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)属黄病毒科。目前发现约90%的输血后非甲非乙型肝炎和70?80%的无输血史的散发型非甲非乙型肝炎由HCV感染所致。部分HCV感染者不出现临床症状，但有50%会发展成为慢性，且易致肝硬化和肝癌。HCV主要通过输血感染(是输血后肝炎的主要致病因子)，也可由静脉注射或母婴和家庭内接触而获得。 第三十一页，共九十九页。 （一）病毒基因组结构 丙型肝炎病毒呈球形颗粒，直径约50nm，有一脂质包膜。核心含单股正链RNA，长9.4 kb。整个基因组只有一个可读框，位于基因组中央，编码一条含有 第三十二页，共九十九页。 RNA病毒中的RNA能自我复制，大部分RNA病毒是单链的，复制一般是先以自己为模板合成一条互补的单链，病毒原有的、起模板作用的链称为正链，新复制的RNA链称为负链。 第三十三页，共九十九页。 第三十四页，共九十九页。 （二）分子诊断方法 1．PCR 2. 核酸杂交 3. bDNA技术 4. 基因芯片技术 第三十五页，共九十九页。 1. 定性检测 虽然抗HCV并不是保护性抗体，临床上可以根据抗HCV来判断是否感染，但由于患者免疫功能的差异，仅有部分患者出现抗HCV，且抗HCV尚会出现时阴时阳的表现。采用分子生物学技术检测到HCV RNA的存在是HCV感染的确证标志。检测HCV-RNA可对丙型肝炎作早期诊断，解决了免疫学检测的“窗口期”问题，可判断疾病是否处于隐性或亚临床状态。在HCV的感染中，第一周内就可以检测出HCV RNA， 第三十六页，共九十九页。 2. 定量检测 可判断HCV的传染性及病毒复制情况，进行病情评估、判断病人预后。还可通过对HCV RNA拷贝数的监测，评价干扰素和其他抗病毒药物的疗效。另外，人们注意到临床分型与疗效的关系，发现如III型HCV患者对干扰素的疗效更佳，此时也需要采用分子生物学技术对HCV进