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微生物的分离纯化 一、平板划线法 图2 分区划线法示意图? 三段分区法 四段分区法 第三十一页，共四十六页。 微生物的分离纯化 一、平板划线法  五段分区法 培养后情况 第三十二页，共四十六页。 微生物的分离纯化 一、平板划线法  单菌落（clone) 菌落（R型） 菌苔(lawn) 细菌的群体形态 第三十三页，共四十六页。 微生物的分离纯化 二、稀释分离法 第三十四页，共四十六页。 微生物的分离纯化 二、稀释分离法 1.取无菌生理盐水（NaCl0.85%)试管三支（每支4.5ml)，编号Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ； 2.无菌操作取混合菌液一环于Ⅰ中，摇匀； 3.同法自Ⅰ管至Ⅱ，自Ⅱ管至Ⅲ； 4.用1ml无菌吸管，分别从Ⅲ、Ⅱ、Ⅰ管中吸取0.2ml于三个无菌培养皿中，编号； 5.倒入熔化冷却至45℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基15ml左右，轻轻摇匀，待凝后倒置于37℃恒温培养箱中培养24-48小时观察结果。 第三十五页，共四十六页。 微生物的培养 一、培养基 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质称培养基。 培养基的基本成分 一般的培养基均需要碳源、氮源、无机盐和水等 第三十六页，共四十六页。 水处理高级氧化技术 微生物基础实验技术回顾详解演示文稿 第一页，共四十六页。 （优选）微生物基础实验技术回顾 第二页，共四十六页。 消毒与灭菌 消毒（disinfectant） 是指杀灭或清除传播媒介上的病原微生物，使之达到无害化的处理。（不一定包括芽孢） 灭菌(sterilant) 是指杀灭或清除传播媒介上的所有微生物（包括芽胞），使之达到无菌程度。 第三页，共四十六页。 常见的消毒灭菌方法 化学消毒灭菌 通过液体化学试剂杀灭微生物繁殖体或芽孢。 消毒对象：物体表面、空气、污染物品等。 消毒方式：擦洗、熏蒸、浸泡等。 物理消毒灭菌 包括高压蒸汽、紫外线、焚烧、HEPA过滤除菌等。 第四页，共四十六页。 化学消毒灭菌 一、含氯消毒剂 常用含氯消毒剂：次氯酸钠、二氯、三氯等 常用剂型：粉剂、片剂、液体 杀菌能力：高水平消毒；1000-5000mg/L浓度。 适用范围：饮用水、餐饮具、果蔬、环境、 物表、污水、污物、排泄物、分泌物 注意事项：密闭干燥保存；消毒后去除残留； 使用液不稳定，加盖，有效期； 对织物漂白，对金属腐蚀用； 操作时应做好个人防护。 第五页，共四十六页。 化学消毒灭菌 二、过氧乙酸 酸性透明液体，易挥发易分解，爆炸危险。 杀菌能力：灭菌，高水平消毒 适用范围：餐饮具、果蔬、环境、物表、空气。 薰蒸消毒：18-20%过氧乙酸5-6 ml（1g）/m3， 放瓷或玻璃容器中，加热密闭薰蒸1-2h。 喷雾消毒：0.1-0.5%，20ml/m3，作用1h。 注意事项：性质不稳，用前配，有盖塑料容器； 对金属腐蚀，对织物漂白作用； 操作时应做好个人防护； 消毒完成后用清水去除残留。 第六页，共四十六页。 化学消毒灭菌 三、乙醇 别名酒精，无色透明液体，易挥发，易燃烧 。 杀菌能力：中水平消毒 适用范围：手、皮肤、小面积物表、医疗器械 使用方法：手与皮肤用75%溶液擦拭1min 物表用75%溶液浸泡或擦拭10min以上 注意事项：乙醇易燃，忌明火；可使蛋白质变性凝固形成 保护层，消毒前应将物品表面的有机物清除， 不宜用于被血、脓、粪便等污染表面消毒；破 坏仪器胶粘物与镜头，橡胶塑料变硬膨胀。 第七页，共四十六页。 物理消毒灭菌 一、热力消毒和灭菌 是最可靠、首选的消毒灭菌方法。分为湿热消毒和灭菌以及干热消毒和灭菌。 适用范围：耐热物品的消毒和灭菌。 常见类型：湿热消毒灭菌主要采用高压蒸汽灭菌。 E.g.：手提式高压蒸汽灭菌器。用于微生物实验 和少量培养基灭菌，一般0 .105MPa在25 到30分钟即可。 干热消毒灭菌，一般用于破璃仪器 如试管、三角 瓶、培养皿等, 灭菌温度在160 ℃, 维持60 分钟。 第八页，共四十